兔出血癥病毒（RHDV）屬于兔病毒屬嵌杯病毒科，能引起成年兔的一種急性、敗血性、高度接觸性傳染病，即兔出血癥（RHD）。RHD爆發(fā)首次報道是在1984年中國江蘇省，隨后該病毒在世界各地流行，目前許多國家存在該流行病。由于缺少合適的細(xì)胞系進(jìn)行RHDV病毒增殖，嚴(yán)重阻礙了RHDV致病機(jī)理的研究。目前，RHDV致病機(jī)理通過間接方法進(jìn)行研究。人組織血型抗原（HBGA）H2是RHDV吸附因子，已經(jīng)被證明。兔肝細(xì)胞是RHDV病毒繁殖的靶細(xì)胞，但是兔肝細(xì)胞沒有表達(dá)HBGAH2，因此可以推斷在兔肝細(xì)胞上存在其他的RHDV吸附因子。研究存在于兔肝細(xì)胞上的RHDV吸附因子或作用因子對于研究RHDV致病機(jī)理具有重要意義。本實驗室前期構(gòu)建了兔肝細(xì)胞的表達(dá)文庫，并通過表達(dá)克隆技術(shù)進(jìn)行文庫篩選與VP60相互作用的候選蛋白，兔鐵蛋白重鏈?zhǔn)荝HDV相互作用候選蛋白之一。為驗證本實驗室前期實驗中初步鑒定的兔鐵蛋白重鏈（FTH）與RHDV衣殼蛋白（VP60）具有相互作用關(guān)系，本研究采用RT-PCR技術(shù)從兔肝臟擴(kuò)增編碼FTH基因，并將其克隆于pET32a（+）中轉(zhuǎn)化至腸桿菌BL21（DE3）Plyss中進(jìn)行表達(dá)。重組FTH... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：46 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 引言
    1.1 病毒概況
    1.2 病原學(xué)
    1.3 流行病學(xué)
    1.4 病毒生活史
    1.5 致病RHDV的進(jìn)化
    1.6 RHDV與宿主的共同進(jìn)化
    1.7 家兔抵抗RHDV的機(jī)制
    1.8 鐵蛋白的研究進(jìn)展
        1.8.1 鐵蛋白的結(jié)構(gòu)和功能
        1.8.2 鐵蛋白與致癌基因、癌癥
    1.9 研究蛋白質(zhì)相互作用的方法
        1.9.1 酵母雙雜交
        1.9.2 標(biāo)簽蛋白
        1.9.3 免疫共沉淀
        1.9.4 熒光共振能量轉(zhuǎn)移技術(shù)
        1.9.5 表達(dá)克隆法
    1.10 本研究的目的及意義
第二章 兔FTH與RHDV相互作用的研究
    2.1 材料和方法
        2.1.1 實驗動物及病毒
        2.1.2 菌株及質(zhì)粒
        2.1.3 主要試劑
        2.1.4 主要儀器
        2.1.5 兔FTH基因的克隆及表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.1.6 FTH蛋白表達(dá)純化
        2.1.7 GST-VP60及GST蛋白的表達(dá)純化
        2.1.8 GSTpulldown研究rFTH與VP60的相互作用
        2.1.9 ELISA研究rFTH與VP60的相互作用
        2.1.10 免疫共沉淀研究FTH與RHDV的相互作用
        2.1.11 ELISA研究FTH與RHDV的相互作用
        2.1.12 血凝抑制試驗
        2.1.13 動物實驗
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 FTH基因的克隆
        2.2.2 FTH基因的表達(dá)與純化
        2.2.3 GST-VP60及GST表達(dá)及純化
        2.2.4 GSTpulldown研究FTH與VP60相互作用結(jié)果
        2.2.5 ELISA研究FTH與VP60相互作用結(jié)果
        2.2.6 免疫共沉淀研究FTH與RHDV相互作用結(jié)果
        2.2.7 ELISA研究FTH與RHDV相互作用結(jié)果
        2.2.8 血凝抑制結(jié)果
        2.2.9 動物試驗結(jié)果
    2.3 討論
第三章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡介



本文編號：3638985