H9N2亞型禽流感病毒（Avain influenza virus,AIV）在全世界廣泛分布,能引起蛋雞產(chǎn)蛋下降,肉雞生長發(fā)育遲緩。雞感染H9N2亞型禽流感病毒后易發(fā)生繼發(fā)感染,特別是和大腸桿菌混合感染,會造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）是革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁的主要成分,是大腸桿菌感染中的一個(gè)重要的毒力因子,它可以通過巨噬細(xì)胞或者樹突狀細(xì)胞激活先天性免疫反應(yīng)。目前,關(guān)于H9N2 AIV感染后繼發(fā)大腸桿菌感染的先天性免疫的研究還不清楚,為了揭示機(jī)體感染H9N2 AIV后繼發(fā)大腸桿菌感染時(shí)的全身性感染和炎癥損傷的潛在機(jī)制和了解二者協(xié)同致病機(jī)理,本研究采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR的方法來檢測雞巨噬細(xì)胞（HD-11）分別單獨(dú)感染H9N2 AIV或E.coli LPS、感染H9N2 AIV同時(shí)添加E.coli LPS刺激、感染H9N2后24 h添加E.coli LPS刺激的先天免疫相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄水平。結(jié)果表明:1.雞巨噬細(xì)胞單獨(dú)感染H9N2 AIV組和復(fù)合H9N2 AIV/E.coli LPS共作用組的病毒載量在各時(shí)間點(diǎn)的上升趨勢相似,且在1 h^8<... 

【文章來源】：西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省211工程院校985工程院校教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：44 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
文獻(xiàn)綜述
    第一章 H9N2 AIV的研究進(jìn)展
        1.1 禽流感概述
            1.1.1 病原學(xué)
            1.1.2 禽流感病毒的復(fù)制及致病機(jī)理
            1.1.3 禽流感病毒的流行病學(xué)
            1.1.4 流感病毒相關(guān)的先天性免疫因子
        1.2 H9N2 AIV的臨床癥狀
        1.3 H9N2 AIV的流行特點(diǎn)
        1.4 H9N2 AIV的遺傳變異
        1.5 H9N2 AIV與其他病原體的混合感染
        1.6 本研究的目的和意義
試驗(yàn)研究
    第二章 雞巨噬細(xì)胞感染H9N2 AIV后E. coli LPS刺激對其先天性免疫相關(guān)基因表達(dá)的影響
        2.1 材料
            2.1.1 細(xì)胞和病毒
            2.1.2 主要試劑
            2.1.3 主要儀器
            2.1.4 主要溶液的配制
        2.2 方法
            2.2.1 病毒的增殖
            2.2.2 細(xì)胞的處理
                2.2.2.1 不同濃度E. coli LPS刺激雞巨噬細(xì)胞
                2.2.2.2 H9N2 AIV單獨(dú)感染雞巨噬細(xì)胞
                2.2.2.3 E. coli LPS單獨(dú)刺激雞巨噬細(xì)胞
                2.2.2.4 雞巨噬細(xì)胞感染H9N2 AIV同時(shí)添加E. coli LPS刺激
                2.2.2.5 雞巨噬細(xì)胞感染H9N2 AIV后 24 h添加E. coli LPS刺激
            2.2.3 細(xì)胞總RNA的提取
            2.2.4 將RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA
            2.2.5 引物的設(shè)計(jì)與合成
            2.2.6 病毒載量的測定
            2.2.7 qRT-PCR法檢測先天性免疫相關(guān)基因的表達(dá)
                2.2.7.1 qRT-PCR法檢測趨化因子CXCLi1、CXCLi2 mRNA的表達(dá)水平
                2.2.7.2 qRT-PCR法檢測促炎性因子IL-1β、IL-6、IFN-α mRNA的表達(dá)水平
                2.2.7.3 qRT-PCR法檢測抑炎性因子IL-10、TGF-β3 mRNA的表達(dá)水平
                2.2.7.4 qRT-PCR法檢測受體TLR4、MDA5 mRNA的表達(dá)水平
                2.2.7.5 qRT-PCR法檢測iNOS mRNA的表達(dá)水平
            2.2.8 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
        2.3 結(jié)果
            2.3.1 H9N2 AIV單獨(dú)感染和H9N2 AIV與LPS共作用雞巨噬細(xì)胞后病毒載量的測定
            2.3.2 不同濃度LPS刺激HD-11細(xì)胞中iNOS表達(dá)水平
            2.3.3 H9N2 AIV感染后LPS刺激HD-11細(xì)胞中趨化因子的表達(dá)水平
            2.3.4 H9N2 AIV感染后LPS刺激HD-11細(xì)胞中促炎性因子的表達(dá)水平
            2.3.5 H9N2 AIV感染后LPS刺激HD-11細(xì)胞中抑炎性因子的表達(dá)水平
            2.3.6 H9N2 AIV感染后LPS刺激HD-11細(xì)胞中模式識別受體的表達(dá)水平
            2.3.7 H9N2 AIV感染后LPS刺激HD-11細(xì)胞中iNOS mRNA的表達(dá)水平
        2.4 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
縮略詞表
致謝
作者簡介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3638728