禽多重耐藥大腸桿菌病給養(yǎng)禽業(yè)造成較大損失,清熱中藥赤芍具有廣譜抗菌作用,并且能與抗生素聯(lián)合（相加或協(xié)同）抑制耐藥大腸桿菌已被研究所證實(shí)。本試驗(yàn)從多重耐藥外排泵的角度探究赤芍主要成分芍藥苷的抗菌增敏機(jī)制,從轉(zhuǎn)錄組和IBT定量蛋白組聯(lián)合分析探討赤芍對禽源多重耐藥大腸桿菌的耐藥消除機(jī)制。本試驗(yàn)通過微量棋盤稀釋法檢測赤芍水提物及其主要成分芍藥苷與抗生素聯(lián)合應(yīng)用對臨床分離的禽多重耐藥大腸桿菌E320和質(zhì)控菌株大腸桿菌ATCC35218的抑制作用進(jìn)行研究,試驗(yàn)結(jié)果證實(shí)赤芍水提物和芍藥苷與磷霉素鈉聯(lián)合用藥均具有協(xié)同抑制多重耐藥大腸桿菌E320的作用（FICI≤0.5）,赤芍水提物聯(lián)合頭孢曲松鈉對E320呈現(xiàn)相加作用（0.5<FICI≤1）,且赤芍水提物聯(lián)合磷霉素鈉能夠協(xié)同抑制大腸桿菌ATCC35218（磷霉素鈉敏感菌株）;利用YASARA軟件,以大腸桿菌多重耐藥Acr AB-TolC系統(tǒng)中的外排泵轉(zhuǎn)運(yùn)子AcrB為靶標(biāo),將其與芍藥苷進(jìn)行分子對接模擬,分子對接結(jié)果顯示芍藥苷與AcrB蛋白受體的結(jié)合能達(dá)到8.333 kJ/mol,作用主要位點(diǎn)是AcrB蛋白受體上Phe628、Phe615、Val61... 

【文章來源】：河北農(nóng)業(yè)大學(xué)河北省

【文章頁數(shù)】：92 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
1 引言
    1.1 國內(nèi)外研究現(xiàn)狀
        1.1.1 大腸桿菌耐藥機(jī)制
        1.1.2 中草藥治療耐藥大腸桿菌情況
        1.1.3 赤芍水提物和芍藥苷應(yīng)用現(xiàn)狀
    1.2 研究目的和意義
2 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 主要試劑、藥品及菌株
        2.1.2 主要設(shè)備儀器
        2.1.3 生物信息軟件
    2.2 方法
        2.2.1 藥物處理
        2.2.2 最小抑菌濃度(MIC)測定
        2.2.3 聯(lián)合抑菌試驗(yàn)
        2.2.4 赤芍主要單體與AcrB分子對接
        2.2.5 芍藥苷對尼羅紅外排抑制試驗(yàn)
        2.2.6 AcrB及正負(fù)調(diào)控基因引物設(shè)計(jì)
        2.2.7 qPCR檢測芍藥苷和磷霉素鈉對AcrB表達(dá)量的影響
        2.2.8 赤芍水提物作用大腸桿菌E320 篩選出耐藥消除菌株
        2.2.9 轉(zhuǎn)錄組測序
        2.2.10 qPCR驗(yàn)證轉(zhuǎn)錄組結(jié)果
        2.2.11 IBT定量蛋白質(zhì)組學(xué)
        2.2.12 轉(zhuǎn)錄組與蛋白組聯(lián)合分析
3 結(jié)果
    3.1 藥物對大腸桿菌的MIC
    3.2 藥物聯(lián)合抑菌試驗(yàn)
        3.2.1 赤芍水提物、芍藥苷聯(lián)合磷霉素鈉對大腸桿菌ATCC35218 的抑菌作用
        3.2.2 赤芍水提物、芍藥苷聯(lián)合磷霉素鈉對大腸桿菌E320 的抑菌作用
    3.3 赤芍單體與AcrB分子對接
    3.4 芍藥苷對尼羅紅外排抑制作用
    3.5 qPCR檢測AcrB及 AcrB正負(fù)調(diào)控基因的表達(dá)量
    3.6 赤芍水提物篩選耐藥消除菌株
    3.7 轉(zhuǎn)錄組結(jié)果
        3.7.1 測序數(shù)據(jù)過濾結(jié)果
        3.7.2 參考基因組比對結(jié)果
        3.7.3 新轉(zhuǎn)錄本(novel transcript)預(yù)測結(jié)果
        3.7.4 與參考基因集(reference gene set)比對、評估及定量分析結(jié)果
        3.7.5 Gene表達(dá)水平分析
        3.7.6 差異表達(dá)基因分析結(jié)果
        3.7.7 ncRNA表達(dá)水平分析
    3.8 qPCR驗(yàn)證轉(zhuǎn)錄組結(jié)果
    3.9 IBT定量蛋白組結(jié)果
        3.9.1 蛋白質(zhì)鑒定結(jié)果
        3.9.2 蛋白質(zhì)IBT定量
        3.9.3 Protein定量重復(fù)性分析
        3.9.4 Protein的 GO注釋分析
        3.9.5 Protein的 COG注釋分析
        3.9.6 Protein的 Pathway注釋分析
        3.9.7 赤芍水提物差異蛋白的GO富集分析
        3.9.8 差異蛋白passway富集分析
        3.9.9 差異蛋白COG注釋分析
        3.9.10 差異表達(dá)蛋白亞細(xì)胞定位
    3.10 轉(zhuǎn)錄組和蛋白組相關(guān)性分析
        3.10.1 蛋白組和轉(zhuǎn)錄組關(guān)聯(lián)分析參數(shù)
        3.10.2 表達(dá)關(guān)聯(lián)分析
        3.10.3 蛋白質(zhì)組與轉(zhuǎn)錄組聚類分析
4 討論
    4.1 芍藥苷對耐藥大腸桿菌的抗菌增敏活性分析
        4.1.1 芍藥苷與AcrB分子對接分析
        4.1.2 尼羅紅外排試驗(yàn)分析
        4.1.3 外排泵相關(guān)基因表達(dá)量分析
    4.2 赤芍水提物對耐藥大腸桿菌的耐藥消除機(jī)制分析
        4.2.1 抗性增敏基因分析
        4.2.2 下調(diào)蛋白增敏機(jī)制分析
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
在讀期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
作者簡介
致謝
附錄


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3634488