非洲豬瘟（African swine fever,ASF）,一種高致病性傳染病,由非洲豬瘟病毒（African swine fever virus,ASFV）引起,其臨床癥狀主要以發(fā)熱、呼吸和神經(jīng)系統(tǒng)功能紊亂、內(nèi)臟器官病變廣泛性出血為主。目前ASF無有效的商品化疫苗可以預(yù)防、治療,一經(jīng)發(fā)現(xiàn)只能大規(guī)模撲殺,因此尋找和篩選ASFV基因組編碼的具有良好免疫原性的蛋白,對(duì)于ASFV的致病性研究和檢測試劑盒的開發(fā)具有重要意義。利用TMHMM分析軟件,對(duì)ASFV基因組編碼的169個(gè)蛋白序列進(jìn)行了分析,發(fā)現(xiàn)ASFV編碼的35個(gè)蛋白有一個(gè)或多個(gè)跨膜區(qū)域,利用WB檢測蛋白的表達(dá)情況并通過IFA方法鑒定亞細(xì)胞定位,發(fā)現(xiàn)E199L、KP117R、E183L、B169L、DP148R、E146L、EP84R、EP402R、H108R具有明顯的細(xì)胞膜定位。本研究根據(jù)已經(jīng)公布的ASFV HLJ/18分離株的基因組的開放閱讀框（open reading frames,ORFs）合成ASFV 169個(gè)ASFV基因組編碼可能的基因,并克隆到pCAGGS-Flag載體,成功構(gòu)建了169個(gè)真核表達(dá)質(zhì)粒。這些ASFV編碼蛋白... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：56 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
主要符號(hào)縮略表
第一章 緒論
    1.1 非洲豬瘟病原學(xué)
        1.1.1 ASFV基因組與復(fù)制
        1.1.2 理化性質(zhì)
    1.2 重要ASFV蛋白及功能
        1.2.1 具有免疫原性ASFV相關(guān)蛋白及功能
        1.2.2 重要ASFV膜蛋白及功能
    1.3 非洲豬瘟流行病學(xué)
        1.3.1 流行概況
        1.3.2 易感動(dòng)物與傳播途徑
    1.4 非洲豬瘟檢測診斷方法
        1.4.1 分子生物學(xué)診斷
        1.4.2 免疫學(xué)檢測
    1.5 非洲豬瘟疫苗的研究進(jìn)展
    1.6 本研究的目的及意義
第二章 ASFV免疫原性膜蛋白的篩選和鑒定
    2.1 材料
        2.1.1 ASFV毒株、細(xì)胞株和質(zhì)粒
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要儀器
        2.1.4 主要溶液及配方
    2.2 方法
        2.2.1 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染試驗(yàn)
        2.2.2 Western blotting試驗(yàn)方法
        2.2.3 激光共聚焦試驗(yàn)
        2.2.4 間接免疫熒光試驗(yàn)
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 ASFV全基因組的膜蛋白分析
        2.3.2 ASFV膜蛋白的表達(dá)鑒定
        2.3.3 IFA方法鑒定ASFV編碼的膜蛋白亞細(xì)胞定位
        2.3.4 利用WB和IFA方法篩選和鑒定具有免疫原性ASFV編碼的膜蛋白
第三章 針對(duì)ASFV膜蛋白p17抗體間接ELISA方法的建立
    3.1 材料
        3.1.1 血清與小肽
        3.1.2 主要儀器
        3.1.3 主要試劑
        3.1.4 主要溶液及配方
    3.2 方法
        3.2.1 最佳抗原包被濃度與被檢血清最佳稀釋倍數(shù)的確定
        3.2.2 最佳封閉液與封閉時(shí)間的確定
        3.2.3 待檢血清工作時(shí)間的確定
        3.2.4 兔抗豬IgG酶標(biāo)抗體孵育條件的確定
        3.2.5 顯色時(shí)間的確定
        3.2.6 臨界值的確定
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 最佳抗原包被濃度與被檢血清最佳稀釋度的確定
        3.3.2 最佳封閉液與封閉時(shí)間的確定
        3.3.3 待檢血清工作時(shí)間的確定
        3.3.4 兔抗豬IgG酶標(biāo)抗體孵育條件的確定
        3.3.5 顯色時(shí)間的確定
        3.3.6 臨界值的確定
第四章 抗ASFV膜蛋白pDP148R單克隆抗體的制備
    4.1 材料
        4.1.1 病毒株、菌株、細(xì)胞株、載體
        4.1.2 主要試劑
        4.1.3 主要儀器
    4.2 方法
        4.2.1 質(zhì)粒構(gòu)建
        4.2.2 DP148R重組蛋白的原核表達(dá),鑒定與純化
        4.2.3 免疫BALB/c小鼠
        4.2.4 DP148R單克隆抗體的制備
    4.3 結(jié)果
        4.3.1 ASFVHLJ/18毒株編碼的pDP148R蛋白是有重要生物學(xué)功能的膜蛋白
        4.3.2 DP148R重組蛋白的原核表達(dá)、鑒定與純化
        4.3.3 雜交瘤細(xì)胞篩選及亞克隆
        4.3.4 單克隆抗體特異性檢測
第五章 討論
第六章 全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[2]非洲豬瘟的流行特征和傳播路線[J]. 張志,康京麗,李曉成.  中國動(dòng)物檢疫. 2018(11)
[3]淺談非洲豬瘟[J]. 劉海余.  豬業(yè)科學(xué). 2018(10)
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[5]非洲豬瘟診斷技術(shù)研究進(jìn)展[J]. 劉賀.  動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2019(07)
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[7]非洲豬瘟病毒抗體檢測間接ELISA方法的建立[J]. 靳雯雯,楊俊興,花群俊,劉建利,曹琛福,曹勝波,曾少靈,陶虹,阮周曦,呂建強(qiáng).  中國獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2014(07)
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[10]非洲豬瘟病毒環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增快速檢測技術(shù)的建立及應(yīng)用[J]. 楊吉飛,關(guān)貴全,劉志杰,汪月鳳,李有全,馬米玲,劉愛紅,任巧云,茍惠天,杜鵬飛,羅建勛,殷宏.  中國動(dòng)物傳染病學(xué)報(bào). 2011(04)

博士論文
[1]基于非洲豬瘟病毒P54蛋白抗原表位的ELISA檢測方法建立及應(yīng)用[D]. 曹琛福.華南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016

碩士論文
[1]HP-PRRSV Nsp2和Nsp12單克隆抗體制備及其抗原表位的鑒定[D]. 畢彩鴻.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2017



本文編號(hào)：3634216