豬傳染性胃腸炎（Transmissible gastroenteritis,TGE）是由豬傳染性胃腸炎病毒（Transmissible gastroenteritis virus）引起的一種高傳染性的豬腸道疾病,具有很高的發(fā)病率和死亡率。TGEV可感染任何日齡豬,主要感染新生仔豬造成仔豬的急性腹瀉。雖然市場上有較多的疫苗用于TGEV的預(yù)防,但是目前還沒有有效的制劑能夠治療TGEV的感染,本研究通過豬IFN-γ（Interferon-γ,IFN-γ）的原核表達(dá)進(jìn)行豬IFN-γ抗TGEV活性和相關(guān)機(jī)制的研究。IFN-γ主要具有調(diào)節(jié)宿主免疫應(yīng)答的能力,但是其最初被發(fā)現(xiàn)是由于具有抗病毒活性,而目前IFN-γ在抑制TGEV感染中的功能知之甚少。本研究使用大腸桿菌原核表達(dá)系統(tǒng)進(jìn)行IFN-γ的表達(dá)純化,該系統(tǒng)具有易于操作,生產(chǎn)量大,速度快,成本低等優(yōu)點(diǎn),目前是一種應(yīng)用最廣泛的表達(dá)系統(tǒng)。本研究首先將優(yōu)化的Fc片段克隆至原核表達(dá)載體pET-21b中獲得pET-21b-Fc重組載體,然后將IFN-γ克隆連接至pET-21b-Fc載體中,成功獲得重組質(zhì)粒pET-21b-IFN-γ-Fc,將其轉(zhuǎn)化到E.col... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：50 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略表
第一章 引言
    1.1 豬傳染性胃腸炎病毒
        1.1.1 豬傳染性胃腸炎生物學(xué)概況
        1.1.2 豬傳染性胃腸炎的預(yù)防和治療
    1.2 干擾素抗病毒的研究進(jìn)展
        1.2.1 干擾素簡介
        1.2.2 干擾素抗病毒研究
    1.3 研究目的和意義
第二章 豬IFN-γ的原核表達(dá)及抗病毒活性的鑒定
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 細(xì)胞，毒株
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)設(shè)備和耗材
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 原核表達(dá)質(zhì)粒pET-21b-IFN-γ-Fc的構(gòu)建
        2.2.2 原核表達(dá)質(zhì)粒pET-21b-IFN-γ-Fc的誘導(dǎo)表達(dá)
        2.2.3 細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 原核表達(dá)質(zhì)粒pET-21b-IFN-γ-Fc的構(gòu)建
        2.3.2 重組表達(dá)質(zhì)粒pET-21b-IFN-γ-Fc的誘導(dǎo)表達(dá)與鑒定
        2.3.3 重組蛋白IFN-γ細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)
        2.3.4 重組表達(dá)質(zhì)粒pET-21b-IFN-γ-Fc抗病毒蛋白活性檢測
    2.4 討論
第三章 IFN-γ抗豬傳染性胃腸炎病毒復(fù)制及相關(guān)機(jī)制研究
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 細(xì)胞，毒株和動物
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        3.1.3 實(shí)驗(yàn)設(shè)備和耗材
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 引物設(shè)計
        3.2.2 細(xì)胞總RNA的提取及反轉(zhuǎn)錄
        3.2.3 熒光定量PCR（qPCR）
        3.2.4 PBMC分離
        3.2.5 間接免疫熒光
        3.2.6 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染
        3.2.7 TCID50檢測
        3.2.8 數(shù)據(jù)統(tǒng)計
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 IFN-γ抑制TGEV在ST細(xì)胞和IPEC- J2細(xì)胞中的復(fù)制
        3.3.2 IRF1對TGEV復(fù)制的影響
        3.3.3 IFN-γ誘導(dǎo)poIRF1的表達(dá)
        3.3.4 TGEV感染在體內(nèi)誘導(dǎo)IFN-γ和poIRF1的表達(dá)
        3.3.5 豬IRF1（poIRF1）在IFN-γ介導(dǎo)信號通路中的影響
        3.3.6 IFN-γ抑制TGEV通過激活I(lǐng)RF-1 信號通路
        3.3.7 IFN-γ對TGEV感染的抑制不完全依賴I型IFN
        3.3.8 IFN-γ誘導(dǎo)I型干擾素的表達(dá)
        3.3.9 IFN-γ與IFN-α協(xié)同抑制TGEV的復(fù)制
    3.4 討論
第四章 全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡歷



本文編號：3632998