牛肉中的肌內(nèi)脂肪含量可以直接影響了牛肉嫩度和風(fēng)味，增加牛肉中肌內(nèi)脂肪含量可以改善牛肉的品質(zhì)。而機(jī)體脂肪組織含量又是脂肪細(xì)胞中甘油三酯積累量的宏觀體現(xiàn)。此外，研究發(fā)現(xiàn)動(dòng)物脂肪的沉積與脂肪代謝是受多種轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控的復(fù)雜生理過(guò)程。脂肪細(xì)胞甘油三酯水解酶（adipose triglyceride lipase，ATGL）可以特異性的脂解甘油三酯，并將甘油三酯水解為甘油二酯，是調(diào)控細(xì)胞中甘油三酯和脂肪酸之間平衡的關(guān)鍵因子。目前，關(guān)于ATGL對(duì)牛前體脂肪細(xì)胞中的甘油三脂積累影響及其調(diào)控機(jī)理仍不清楚。為了探索牛ATGL基因的功能，本研究以牛ATGL基因?yàn)槟繕?biāo)基因，以牛前體脂肪細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，以腺病毒介導(dǎo)的基因過(guò)量表達(dá)技術(shù)和shRNA干擾技術(shù)為手段，直接發(fā)掘牛GL基因在牛前體脂肪細(xì)胞甘油三脂積累過(guò)程中的重要作用。同時(shí)，在轉(zhuǎn)錄水平上初步探索目標(biāo)基因?qū)σ恍┲匾闹炯?xì)胞分化、脂肪合成及代謝相關(guān)基因的影響。主要研究成果如下：（1）克隆得到秦川牛ATGL基因的CDS區(qū)序列，并研究了其在牛脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化過(guò)程中的mRNA表達(dá)規(guī)律。（2）構(gòu)建了牛ATGL基因的腺病毒過(guò)表達(dá)載體，并包裝獲得了高滴度重組腺病毒，建立了... 

【文章來(lái)源】：西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省211工程院校985工程院校教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：87 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 研究背景
    1.2 脂肪組織和脂肪細(xì)胞的分化研究進(jìn)展
        1.2.1 脂肪組織的分類(lèi)
        1.2.2 脂肪細(xì)胞增殖與分化
    1.3 脂肪細(xì)胞甘油三脂脂解的研究進(jìn)展
        1.3.1 脂肪酶與甘油三酯水解
        1.3.2 PAT 家族蛋白與甘油三酯水解
        1.3.3 調(diào)控甘油三酯水解的主要通路
    1.4 表達(dá)載體系統(tǒng)研究進(jìn)展
        1.4.1 非病毒表達(dá)載體系統(tǒng)
        1.4.2 病毒表達(dá)載體系統(tǒng)
    1.5 RNA 干擾研究進(jìn)展
    1.6 本研究的目標(biāo)、意義和內(nèi)容
        1.6.1 研究目標(biāo)和意義
        1.6.2 研究?jī)?nèi)容
第二章 牛 ATGL 基因在牛脂肪細(xì)胞分化過(guò)程的中基因表達(dá)規(guī)律研究
    2.1 材料與方法
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)方法
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 牛前體脂肪細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察
        2.2.2 油紅 O 染色結(jié)果
        2.2.3 Real-Time PCR 引物檢測(cè)
        2.2.4 ATGL 基因在脂肪細(xì)胞不同時(shí)間段的表達(dá)規(guī)律
    2.3 討論
第三章 牛 ATGL 基因重組腺病毒過(guò)表達(dá)載體的構(gòu)建與鑒定
    3.1 材料與方法
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)方法
    3.2 結(jié)果
        3.2.1 ATGL 過(guò)表達(dá)載體的構(gòu)建與鑒定
    3.3 討論
    3.4 小結(jié)
第四章 牛 ATGL 基因 shRNA 序列的篩選及其腺病毒載體的構(gòu)建與鑒定
    4.1 材料與方法
        4.1.1 材料
        4.1.2 方法
    4.2 結(jié)果
        4.2.1 shRNA 檢測(cè)及 pENTR-U6-shRNA 表達(dá)載體構(gòu)建
        4.2.2 Ad-shRNA 病毒重組子的構(gòu)建及鑒定
        4.2.3 Ad-shRNA 腺病毒的包裝、擴(kuò)增及滴度測(cè)定
        4.2.4 AD-shRNA 病毒有效性鑒定和篩選
    4.3 討論
    4.4 小結(jié)
第五章 牛 ATGL 基因?qū)εＶ炯?xì)胞中甘油三脂積累的影響
    5.1 材料與方法
        5.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        5.1.2 實(shí)驗(yàn)方法
    5.2 結(jié)果
        5.2.1 Real-time PCR 引物檢測(cè)
        5.2.2 ATGL 重組腺病毒表達(dá)載體和干擾載體侵染和細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察
        5.2.3 ATGL 腺病毒處理后甘油三脂檢測(cè)
        5.2.4 脂肪細(xì)胞分化相關(guān)基因的 mRNA 表達(dá)情況
        5.2.5 脂肪合成相關(guān)基因的 mRNA 表達(dá)情況
        5.2.6 脂肪代謝相關(guān)基因的 mRNA 表達(dá)情況
    5.3 討論
        5.3.1 下調(diào) ATGL 表達(dá)量使脂肪細(xì)胞中甘油三酯的量增多、脂滴變明顯
        5.3.2 上調(diào) ATGL 表達(dá)量使脂肪細(xì)胞中甘油三酯的量減少、脂滴數(shù)目變少
        5.3.3 牛 ATGL 基因?qū)χ炯?xì)胞分化相關(guān)基因的調(diào)控作用分析
        5.3.4 牛 ATGL 基因?qū)χ竞铣膳c代謝相關(guān)基因的調(diào)控作用分析
    5.4 小結(jié)
第六章 結(jié)論
    6.1 實(shí)驗(yàn)結(jié)論
    6.2 創(chuàng)新點(diǎn)
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
作者簡(jiǎn)介
    個(gè)人基本情況
    學(xué)習(xí)經(jīng)歷
    攻讀博士學(xué)位期間發(fā)表文章情況
    攻讀博士學(xué)位期間獲獎(jiǎng)情況


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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