狂犬病是由狂犬病病毒（Rabies virus,RABV）引起的一種重要人獸共患病,每年導(dǎo)致約59,000人死于該病,嚴(yán)重威脅著人類社會(huì)公共衛(wèi)生安全。人間狂犬病基本經(jīng)犬類咬、抓傷所傳播,一旦發(fā)病致死率幾乎為100%。目前仍無有效治療狂犬病的藥物。深入研究RABV入侵宿主細(xì)胞的機(jī)制,不僅有利于深入闡明RABV致病機(jī)制,還將有助于設(shè)計(jì)新型的狂犬病疫苗和篩選有效的狂犬病治療藥物靶點(diǎn)。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)多個(gè)影響RABV入侵的宿主因子,但仍然存在其它的關(guān)鍵宿主因子影響RABV的入侵。因此,繼續(xù)挖掘影響RABV入侵的關(guān)鍵宿主因子具有重要意義。本研究團(tuán)隊(duì)前期開展了影響RABV生命周期相關(guān)宿主因子的RNA干擾（RNA interference,RNAi）篩選工作,發(fā)現(xiàn)了整合素 β1（integrin β1,ITGB1）在 RABV 感染人胚胎腎細(xì)胞（Human Embryonic Kidney 293 cell,HEK-293）中起重要作用。本研究通過siRNA（short interfering RNA）干擾技術(shù)分別下調(diào)表達(dá)HEK293 細(xì)胞和小鼠神經(jīng)母瘤細(xì)胞（mouse Neuroblastoma ce... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖３．１?ｓｉＲＮＡ敲低和質(zhì)粒過表達(dá)丨ＴＧＢ丨影響ＲＡＢＶ對細(xì)胞的感染

?ｂＨＢＢ?ｔ?２５?ｔｓｔ??ＨＷ１＾?ｉＢｉｇａＳ?Ｗ＾Ｓ＾ｋ?ＩＲＰ?Ｕｉｇ／ｍＬｌ?ｌＴＧＢｌＥ０（Ｍｇ／ｍＬ）??Ｂ??ＩＲＰ?（ｐｇ／ｍＬ）??ＩＴＧＢ１ｃｄ?（ｐｇ／ｍＬ）???ｐｇ／ｍＬ?１００?２５?５０?１?００?１?５°＂?＇１５°?＾??Ｈｏｅｃｈｓｔ?｜?１００－?ｒ＾｜?＾?Ｊ－?ｊ?－１００?Ｉ??—圃?＿鑫＿?５。ｉ??Ｍｅｒｇｅ?■顔１°?Ｗ?２．５?５ｂ?Ｔ。??ＩＲＰ（ＭｇｙｍＬ）?ＩＴＧＢ１ｔ０?（Ｍｇ／ｍＬ）??圖３．４ＩＴＧＢ１可溶性蛋白（ＩＴＧＢ１ＥＤ）中和ＲＡＢＶ對細(xì)胞的感染。ＩＴＧＢ１ＥＤ?（Ａ）在??ＨＥＫ２９３細(xì)胞（Ａ）和Ｎ２ａ細(xì)胞（Ｂ）?ｈｌＴＧＢｌｍ能夠中和ＥＲＡ－ｅＧＦＰ的感染能力，ｊｆ－??具有劑量依賴性。高濃度的ＧＳＴ標(biāo)簽的非相關(guān)性蛋「Ｉ?（ＩＲＰ）作為對照。細(xì)胞用以檢測??細(xì)胞活力、染色獲得感染圖像并分析Ｋ感染率。細(xì)胞活忡和感染率顯示為與對照組丨狀??處理組相比的扣對量，對照組定義為１００％。數(shù)據(jù)差異性統(tǒng)計(jì)應(yīng)Ｔ檢驗(yàn)顯示。＊，＾＜０．０５；??＊＊＊，尸＜０．００１。??Ｆｉｇｕｒｅ?３．１．?Ｓｏｌｕｂｌｅ?ＪＴＣＢ１?（ＩＴＧＢＵｄ）?ｎｅｕｔｒａｌｉｚｅｓ?ｉｎｆｅｃｔｉｖｉｔｙ?ｏｆ?ＲＡＢＶ?ｉｎ?ｃｅｌｌｓ．?ＩＴＧＢ１ＥＤ??ｎｅｕｔｒａｌｉｚｅｄ?ＥＲＡ－ｅＧＦＰ?ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ?ｉｎ?ＨＥＫ２９３?（Ａ）?ａｎｄ?Ｎ２ａ?（Ｂ）?ｃｅｌｌｓ?ｉｎ?ａ?ｄｏｓｅ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ??ｍａｎｎｅｒ．?ＧＳＴ－ｔａｇｇｅｄ?ｉｒｒｅｌａｔｉｖｅ?ｐｒｏｔｅｉｎ?（ＴＲＰ）?ａｔ?ｈｉｇｈ?ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ?

?－－－－??Ａ－４?—??ｌ〇Ｇ７ｉ?—?？??ｋ〇ｊｉ?Ｉ?Ｉ??１７０?Ｉ?一一?■?Ｉ?ｆ?１５〇ｌ?＾?，，?．??一?■?＇＿Ｍ?Ｉ－?Ｉ?１??＾?＇Ｔｏ?＾?■曬ＥＲＡＧ?｜?１００－?——??Ｓ５?ｉ?丄????ＵＪ??１７０?—??＞ｔＧＢｉ?！?Ｍ－?■?—??ａ?ｌｏｏ??５?丄??６?ｔｏｏ?纏?１??麵ＥＲＡＧ?ｋ?Ｊ?＾ｐｉ?ＩＩ?１??５５?ｍｍ??ＷＴ?ｌ〇Ｑ？Ｊ?Ａ－４??圖３．５丨ＴＧＢｌ抗體阻斷ＲＡＢＶ對細(xì)胞的感染。（Ａ）ＩＴＧＢｌ鼠單克隆抗體Ａ－４在ＨＥＫ２９３??細(xì)胞（Ｉ）和Ｎ２ａ細(xì)胞（ＩＩ）上能夠阻斷ＥＲＡ－ｅＧＦＰ的感染能力，并具有劑量依賴性。??高濃度的鼠ＩｇＧ２ａ作為對照。細(xì)胞用以檢測細(xì)胞活力、染色獲得感染圖像并分析其感染??率。細(xì)胞活性和感染率顯示為與對照組ＩｇＧ２ａ處理組相比的相對量，對照組定義為１００％。??（Ｂ）ｃｏ－ＩＰ實(shí)驗(yàn)證明Ａ－４削弱了?ＩＴＧＢ１與ＲＡＢＶＧ之間的相互作用。無抗體處理（ＮＴ）??和ＩｇＧ２ａ處理的ＩＴＧＢｌ－Ｆｌａｇ實(shí)驗(yàn)組作為對照。ＩＴＧＢ１與ＲＡＢＶ?Ｇ的相互作用水平通過??Ｉｍａｇｅ?Ｊ軟件分析ｃｏ－ＩＰ實(shí)驗(yàn)前后ＥＲＡＧ－Ｍｙｃ灰度值比值（ＥＲＡＧ－Ｍｙｃ：?ＩＰ／Ｉｎｐｕｔ）表示，??３１??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]煙堿型乙酰膽堿受體及其亞單位的結(jié)構(gòu)功能[J]. 王秋雨,金莉莉,LI Ziwei.  細(xì)胞生物學(xué)雜志. 2004(03)



本文編號：3627173