奶牛養(yǎng)殖業(yè)為寧夏地區(qū)畜牧業(yè)主要產(chǎn)業(yè)之一,近幾年隨著奶牛存欄數(shù)日趨增加,對(duì)奶牛疾病的防控難度也隨之提升。在奶牛乳房炎方面,由肺炎克雷伯氏菌引起的奶牛乳房炎在2016年年底至2017年年初頻繁出現(xiàn),患病牛只除表現(xiàn)乳房炎外,部分牛只還出現(xiàn)全身性感染癥狀甚至死亡現(xiàn)象,給牧場(chǎng)造成巨大損失。該菌對(duì)寧夏地區(qū)奶牛養(yǎng)殖業(yè)造成一定安全隱患,但對(duì)寧夏地區(qū)牛源肺炎克雷伯氏菌的研究鮮有報(bào)道�；谶@一背景,本研究選擇對(duì)寧夏地區(qū)分離得到的牛源肺炎克雷伯氏菌進(jìn)行一系列實(shí)驗(yàn)室檢測(cè),以期為今后寧夏地區(qū)牛源肺炎克雷伯氏菌的防治工作提供一定理論支持。本研究通過對(duì)送往實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的病料進(jìn)行細(xì)菌分離培養(yǎng)初步獲得疑似菌株。將疑似菌株進(jìn)行純化培養(yǎng)后,對(duì)純化菌株進(jìn)行生化試驗(yàn)、細(xì)菌特征性基因（khe基因）PCR擴(kuò)增從疑似菌株中篩選出肺炎克雷伯氏菌。得到肺炎克雷伯氏菌后,對(duì)菌株進(jìn)行毒力基因及耐藥基因分析,從而通過分子生物學(xué)角度為寧夏地區(qū)牛源肺炎克雷伯氏菌病的治療和防治提供—定理論依據(jù)。結(jié)果表明,本研究通過生化實(shí)驗(yàn)及細(xì)菌特異性基因khe基因PCR擴(kuò)增最終從疑似菌株中確定14株肺炎克雷伯氏菌。對(duì)菌株進(jìn)行毒力基因檢測(cè)發(fā)現(xiàn),mrkd毒力基因檢出率為... 

【文章來源】：寧夏大學(xué)寧夏回族自治區(qū)211工程院校

【文章頁數(shù)】：46 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－１肺炎克雷伯氏菌ｋｈｅ基因ＰＣＲ擴(kuò)增產(chǎn)物電泳圖譜??Ｍ：ＤＮＡ?ｍａｒｋｅｒ?ＤＬ２０００；?Ｎ：陰性對(duì)照；１－１４：?ｋｈｅ?基因?ＰＣＲ?擴(kuò)增產(chǎn)物??－

（表中各項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)代碼含義見附錄）??２．?３．?３肺炎克雷伯氏菌溶血酵素基因（ｋｈｅ）鑒定??細(xì)菌溶血酵素基因（ｋｈｅ）凝膠電泳圖譜見圖２－１：??圖２－１肺炎克雷伯氏菌ｋｈｅ基因ＰＣＲ擴(kuò)增產(chǎn)物電泳圖譜??Ｍ：ＤＮＡ?ｍａｒｋｅｒ?ＤＬ２０００；?Ｎ：陰性對(duì)照；１－１４：?ｋｈｅ?基因?ＰＣＲ?擴(kuò)增產(chǎn)物??Ｆｉｇ．２－１?ＰＣＲ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｐｒｏｄｕｃｔｓ?ｏｆ?ｋｈｅ?ｇｅｎｅ??Ｍ：?ＤＮＡ?ｍａｋｅｒ?ＤＬ２０００：?Ｎ：?Ｔｈｅ?ｎｅｇａｔｉｖｅ?ｃｏｎｔｒｏｌ；?１－１４：?ＰＣＲ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｐｒｏｄｕｃｔｓ?ｏｆ?ｋｈｅ?ｇｅｎｅ??結(jié)果顯示，有１４株疑似菌株ＰＣＲ擴(kuò)增產(chǎn)物大小４００ｂｐ左右，已知該基因ＰＣＲ擴(kuò)増產(chǎn)物大小??為４２５ｂｐ

分別為：ｍｒｋｄ?為?２８．?６％，ｗａｂｇ?為?９２．?９％，?ｒｍｐａ?為?９２．?９％，ｕｒｅａ?為?０．?０％，?ｆｉｍｈ?為?１４．?３％。??以下為部分菌株毒力基因ＰＣＲ擴(kuò)增產(chǎn)物凝膠電泳圖譜。??部分肺炎克雷伯氏菌分離株ｍｒｋｌ）毒力基因凝膠電泳圖譜見圖３－１：??■■ｉｓ??圖３－１肺炎克雷伯氏菌ｍｒｋｄ毒力基因ＰＣＲ擴(kuò)增產(chǎn)物電泳圖譜??Ｍ：?ＤＮＡ?ｍａｒｋｅｒ?ＤＬ２０００：?Ｎ：陰性對(duì)照；Ｐ：陽性對(duì)照；１－４：細(xì)菌ｍｒｋｄ基因擴(kuò)增產(chǎn)物??Ｆｉｇ．３－１?ＰＣＲ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｐｒｏｄｕｃｔｓ?ｏｆ?ｍｒｋｄ?ｇｅｎｅ??－１７－??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]一株牛源肺炎克雷伯氏菌的分離鑒定與耐藥基因型檢測(cè)[J]. 蒙正群,冷依伊,任梅滲,劉亞東,王印,姚學(xué)萍,楊澤曉.  浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2017(04)
[2]牛源肺炎克雷伯氏菌的分離鑒定及遺傳進(jìn)化分析[J]. 馮娜,高翔,肖敏,寧建剛,邢小勇,包世俊.  中國(guó)獸醫(yī)科學(xué). 2016(11)
[3]毛皮動(dòng)物肺炎克雷伯氏菌的研究現(xiàn)狀[J]. 姜紹全.  山東畜牧獸醫(yī). 2016(01)
[4]產(chǎn)ESBLs肺炎克雷伯菌耐藥表型分析與整合子基因檢測(cè)的研究[J]. 陳燕敏,廖于峰,芮球紅.  中華醫(yī)院感染學(xué)雜志. 2015(23)
[5]肺炎克雷伯氏菌毒力因子的研究進(jìn)展[J]. 康燕菲,田平芳,譚天偉.  微生物學(xué)報(bào). 2015(10)
[6]產(chǎn)碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌的耐藥基因及流行病學(xué)研究進(jìn)展[J]. 劉婧嫻,俞靜,劉瑛.  中國(guó)感染與化療雜志. 2015(01)
[7]肺炎克雷伯菌耐藥研究進(jìn)展[J]. 劉保光,吳華,張萍英.  畜牧與獸醫(yī). 2014(02)
[8]不同動(dòng)物種源肺炎克雷伯氏菌分離株23S rRNA序列分析[J]. 鐘世勛,王迪,曲亭合,潘德琴,黃璇,李奕芙,邵明旭,朱瑞良.  中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2013(11)
[9]獸醫(yī)臨床肺炎克雷伯菌的流行現(xiàn)狀及防治措施研究[J]. 劉保光,賀志沛,吳華,劉凱,楊康林.  農(nóng)業(yè)災(zāi)害研究. 2013(08)
[10]16S rDNA序列在大批量細(xì)菌分離物分子鑒定中的應(yīng)用研究[J]. 陳源源,沈微,樊游,陳獻(xiàn)忠,Suren Singh,石貴陽,王正祥.  工業(yè)微生物. 2013 (02)

碩士論文
[1]貂源肺炎克雷伯氏菌血清型和毒力基因的檢測(cè)及其致病性研究[D]. 王建莉.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017
[2]寧夏地區(qū)犢牛腹瀉性大腸桿菌的分型鑒定及其主要毒力基因檢測(cè)[D]. 牛耀祖.寧夏大學(xué) 2016
[3]肺炎克雷伯菌的血清分型及毒力基因分布的研究[D]. 和晉渝.重慶醫(yī)科大學(xué) 2012



本文編號(hào)：3626967