偽狂犬病毒（Pseudorabies virus,PRV）是皰疹病毒科α-皰疹病毒亞科中的重要成員。偽狂犬病是PRV引發(fā)的豬的重要傳染病之一,對養(yǎng)豬行業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟損失。目前偽狂犬病已被農(nóng)業(yè)部列為優(yōu)先防治的16種動物疫病之一。因此研究PRV復制、與宿主之間互作等過程對尋找治療α-皰疹病毒的藥物靶點、研制新型疫苗是十分必要的。本課題以偽狂犬病毒（PRV）為材料,系統(tǒng)地研究豬腎上皮細胞（PK-15）在PRV感染后的信號通路轉(zhuǎn)導過程。應用iTRAQ聯(lián)用LC-MS/MS技術(shù)獲取宿主蛋白質(zhì)磷酸化水平的全局動態(tài)并基于生物信息學全面分析PRV感染對PK-15蛋白質(zhì)磷酸化的影響。應用siRNA敲低atf2等基因表達、抑制劑阻斷MAPK Pathway（ERK、JNK、p38通路）信號傳導、慢病毒gRNA表達系統(tǒng)及Cas9表達細胞系構(gòu)建atf2基因缺失細胞系、超表達atf2完整型及69/71蘇氨酸磷酸化位點突變型表達質(zhì)粒等實驗方法,研究atf2基因及MAPK Pathway對PRV復制的影響。期望從宿主磷酸化蛋白質(zhì)組學入手,對PRV在PK-15中的增殖機制進行深入研究。該研究可以對尋找PRV增殖依賴... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學湖北省211工程院校教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

PRV粒子結(jié)構(gòu)示意圖

atf2 基因與許多基因的啟動子調(diào)控有關(guān)，包括與炎癥信號通路相關(guān)的干擾素β1(Lau E. et al 2015)、細胞周期相關(guān)的 cyclin A(Shimizu M. et al 1998)和糖基化相圖 1-2ATF2 的結(jié)構(gòu)與磷酸化位點(Watson et al. 2017)Fig. 1-2 Structure and phosphorylation sites of ATF2(Watson et al. 2017)

最基本、最普遍也是最重要的方式之一，它參與并調(diào)控生命活動的許多過程(Zolnierowicz S. and Bollen, M. 2000)。磷酸化修飾是蛋白質(zhì)酯化的過程，磷酸化過程如示意圖（圖1-3）所示，通過在蛋白質(zhì)氨基酸側(cè)鏈加入帶強負電的磷酸基團，在蛋白激酶的催化作用下將ATP或GTP的γ位磷酸基轉(zhuǎn)移到被修飾蛋白質(zhì)的氨基酸殘基，如絲氨酸（Ser）、酪氨酸（Tyr）和蘇氨酸（Thr）等，改變蛋白質(zhì)原本的構(gòu)型，獲得活性及與其他分子互作的能力(Cohen P.2002,Kim J. H. et al2004)。蛋白質(zhì)組（proteome）最早由 Marc Wilkins 于 1996 年使用，它意指為一個細胞的總體蛋白質(zhì)含量，是基因組的蛋白質(zhì)補體(Wilkins M. R. et al 1996) 。生物體內(nèi)基因的大部分功能信息都是以蛋白質(zhì)組形式體現(xiàn)。蛋白質(zhì)組學對于疾病的早期診斷、預防及病情發(fā)展的檢測至關(guān)重要。此外

【參考文獻】：
期刊論文
[1]豬偽狂犬病的診斷與防治[J]. 吳運譜.  現(xiàn)代畜牧獸醫(yī). 2013(08)
[2]偽狂犬病流行現(xiàn)狀及我國應采取的防制措施[J]. 童光志,陳煥春.  中國獸醫(yī)學報. 1999(01)



本文編號：3626014