偽狂犬病毒（Pseudorabies virus,PRV）是皰疹病毒科α-皰疹病毒亞科中的重要成員。偽狂犬病是PRV引發(fā)的豬的重要傳染病之一,對(duì)養(yǎng)豬行業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。目前偽狂犬病已被農(nóng)業(yè)部列為優(yōu)先防治的16種動(dòng)物疫病之一。因此研究PRV復(fù)制、與宿主之間互作等過(guò)程對(duì)尋找治療α-皰疹病毒的藥物靶點(diǎn)、研制新型疫苗是十分必要的。本課題以偽狂犬病毒（PRV）為材料,系統(tǒng)地研究豬腎上皮細(xì)胞（PK-15）在PRV感染后的信號(hào)通路轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程。應(yīng)用iTRAQ聯(lián)用LC-MS/MS技術(shù)獲取宿主蛋白質(zhì)磷酸化水平的全局動(dòng)態(tài)并基于生物信息學(xué)全面分析PRV感染對(duì)PK-15蛋白質(zhì)磷酸化的影響。應(yīng)用siRNA敲低atf2等基因表達(dá)、抑制劑阻斷MAPK Pathway（ERK、JNK、p38通路）信號(hào)傳導(dǎo)、慢病毒gRNA表達(dá)系統(tǒng)及Cas9表達(dá)細(xì)胞系構(gòu)建atf2基因缺失細(xì)胞系、超表達(dá)atf2完整型及69/71蘇氨酸磷酸化位點(diǎn)突變型表達(dá)質(zhì)粒等實(shí)驗(yàn)方法,研究atf2基因及MAPK Pathway對(duì)PRV復(fù)制的影響。期望從宿主磷酸化蛋白質(zhì)組學(xué)入手,對(duì)PRV在PK-15中的增殖機(jī)制進(jìn)行深入研究。該研究可以對(duì)尋找PRV增殖依賴... 

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

PRV粒子結(jié)構(gòu)示意圖

atf2 基因與許多基因的啟動(dòng)子調(diào)控有關(guān)，包括與炎癥信號(hào)通路相關(guān)的干擾素β1(Lau E. et al 2015)、細(xì)胞周期相關(guān)的 cyclin A(Shimizu M. et al 1998)和糖基化相圖 1-2ATF2 的結(jié)構(gòu)與磷酸化位點(diǎn)(Watson et al. 2017)Fig. 1-2 Structure and phosphorylation sites of ATF2(Watson et al. 2017)

最基本、最普遍也是最重要的方式之一，它參與并調(diào)控生命活動(dòng)的許多過(guò)程(Zolnierowicz S. and Bollen, M. 2000)。磷酸化修飾是蛋白質(zhì)酯化的過(guò)程，磷酸化過(guò)程如示意圖（圖1-3）所示，通過(guò)在蛋白質(zhì)氨基酸側(cè)鏈加入帶強(qiáng)負(fù)電的磷酸基團(tuán)，在蛋白激酶的催化作用下將ATP或GTP的γ位磷酸基轉(zhuǎn)移到被修飾蛋白質(zhì)的氨基酸殘基，如絲氨酸（Ser）、酪氨酸（Tyr）和蘇氨酸（Thr）等，改變蛋白質(zhì)原本的構(gòu)型，獲得活性及與其他分子互作的能力(Cohen P.2002,Kim J. H. et al2004)。蛋白質(zhì)組（proteome）最早由 Marc Wilkins 于 1996 年使用，它意指為一個(gè)細(xì)胞的總體蛋白質(zhì)含量，是基因組的蛋白質(zhì)補(bǔ)體(Wilkins M. R. et al 1996) 。生物體內(nèi)基因的大部分功能信息都是以蛋白質(zhì)組形式體現(xiàn)。蛋白質(zhì)組學(xué)對(duì)于疾病的早期診斷、預(yù)防及病情發(fā)展的檢測(cè)至關(guān)重要。此外

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]豬偽狂犬病的診斷與防治[J]. 吳運(yùn)譜.  現(xiàn)代畜牧獸醫(yī). 2013(08)
[2]偽狂犬病流行現(xiàn)狀及我國(guó)應(yīng)采取的防制措施[J]. 童光志,陳煥春.  中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào). 1999(01)



本文編號(hào)：3626014