禽致病性大腸桿菌（Avian pathogenic Escherichia coli, APEC）可導(dǎo)致雞、鴨等多種禽類的腸道外疾病,臨床癥狀復(fù)雜多樣,包括心包炎、肝周炎、氣囊炎、腹膜炎、敗血癥和腦炎等,該病波及范圍廣,嚴重制約著各地養(yǎng)禽業(yè)的健康發(fā)展。除了禽類,它還可以導(dǎo)致小鼠的腦膜炎癥狀,無疑對人類健康構(gòu)成了潛在的威脅。毒力因子是APEC致病過程中的重要因素。已發(fā)現(xiàn)的APEC毒力因子主要包括黏附素、侵襲素、抗血清存活因子、鐵攝取系統(tǒng)、空泡形成毒素以及其他毒力因子。有研究證明,APEC與人類腸道外致病性大腸桿菌（Extraintestinal Pathogenic E. coli, ExPEC）利用共同的毒力基因貯存庫,因此,加強對APEC毒力因子的監(jiān)測和研究,對于養(yǎng)禽業(yè)和公共衛(wèi)生均具有重要意義。APEC的致病力是由多種毒力因子共同作用的結(jié)果,新的毒力因子的發(fā)現(xiàn)將有助于APEC致病機理的闡述。Ⅵ型分泌系統(tǒng)（Type VI secretion system, T6SS）是新近發(fā)現(xiàn)的革蘭氏陰性菌的蛋白分泌系統(tǒng)。研究證明,T6SS在不同菌中扮演多樣的角色,包括促進毒力、抑制細菌的復(fù)制和毒力以... 

【文章來源】：南京農(nóng)業(yè)大學江蘇省211工程院校教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：104 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
符號及縮略語說明
第一篇 文獻綜述
    第一章 禽致病性大腸桿菌概述
        1 病原學
        2 流行病學
        3 臨床癥狀和病理變化
        4 致病機理
        5 腸道外致病性大腸桿菌毒力因子研究進展
            5.1 黏附素
            5.2 侵襲素
            5.3 抗血清存活因子
            5.4 攝鐵系統(tǒng)
            5.5 毒素
            5.6 毒力基因調(diào)控子
            5.7 其它毒力因子
        參考文獻
    第二章 Ⅵ型分泌系統(tǒng)概述
        1 細菌的分泌系統(tǒng)
        2 T6SS的發(fā)現(xiàn)
            2.1 T6SS的發(fā)現(xiàn)與命名
            2.2 致病性大腸桿菌中的T6SS
        3 T6SS的組分及運轉(zhuǎn)機制
            3.1 T6SS的基因結(jié)構(gòu)及蛋白組成
            3.2 T6SS的運轉(zhuǎn)機制
        4 Ⅵ型分泌系統(tǒng)的功能研究進展
            4.1 毒力因子
            4.2 抗毒力因素
            4.3 調(diào)節(jié)菌間關(guān)系
            4.4 T6SS的功能多樣性
        參考文獻
第二篇 試驗研究
    第三章 禽致病性大腸桿菌毒力基因多重PCR方法的建立
        摘要
        1 材料與方法
            1.1 菌株
            1.2 主要試劑和儀器
            1.3 引物設(shè)計
            1.4 菌液的培養(yǎng)及PCR模板的制備
            1.5 單基因PCR擴增
            1.6 多重PCR反應(yīng)體系的建立及優(yōu)化
            1.7 多重PCR的特異性試驗
            1.8 多重PCR的敏感性試驗
            1.9 APEC毒力基因的多重PCR檢測
        2 結(jié)果
            2.1 單基因PCR擴增結(jié)果
            2.2 多重PCR反應(yīng)體系的建立及優(yōu)化
            2.3 多重PCR特異性檢測結(jié)果
            2.4 多重PCR敏感性檢測結(jié)果
            2.5 APEC的毒力基因檢測結(jié)果
        3 討論
        參考文獻
        ABSTRACT
    第四章 禽致病性大腸桿菌T6SS基因的序列分析、流行病學調(diào)查及克隆表達
        摘要
        1 材料與方法
            1.1 菌株、質(zhì)粒和實驗動物
            1.2 主要試劑和儀器
            1.3 DE719 T6SS序列測定及dotU基因的分布
            1.4 重組表達載體的構(gòu)建及轉(zhuǎn)化
            1.5 融合蛋白的表達
            1.6 融合蛋白的純化
            1.7 兔抗血清的制備
            1.8 DotU在DE719中的表達
        2 結(jié)果
            2.1 DE719 T6SS序列及dotU基因的分布率
            2.2 重組表達載體的構(gòu)建與鑒定
            2.3 融合蛋白的表達與純化
            2.4 兔抗血清的制備及鑒定
            2.5 DotU在DE719中的表達
        3 討論
        參考文獻
        ABSTRACT
    第五章 禽致病性大腸桿菌DE719 T6SS2基因缺失株、互補株的構(gòu)建及特性分析
        摘要
        1 材料與方法
            1.1 菌株和質(zhì)粒
            1.2 主要試劑和儀器
            1.3 實驗動物及細胞
            1.4 缺失引物及缺失株鑒定引物
            1.5 DE719電轉(zhuǎn)感受態(tài)制備及DE719-pKD46的構(gòu)建
            1.6 基因缺失株的構(gòu)建
            1.7 互補株的構(gòu)建
            1.8 熒光定量PCR檢測dotU表達水平
            1.9 生長曲線及運動性測定
            1.10 凝集試驗
            1.11 環(huán)境耐受力試驗
            1.12 血清殺菌試驗
            1.13 黏附侵襲試驗及細胞凋亡檢測
            1.14 胞內(nèi)存活試驗及細胞因子檢測
            1.15 體內(nèi)致病力試驗
            1.16 分泌蛋白的檢測
        2 結(jié)果
            2.1 缺失株、互補株的構(gòu)建及鑒定
            2.2 生長曲線及運動性
            2.3 凝集試驗
            2.4 環(huán)境耐受力試驗
            2.5 血清殺菌試驗
            2.6 黏附侵襲試驗及細胞凋亡檢測
            2.7 胞內(nèi)存活試驗及細胞因子檢測
            2.8 體內(nèi)致病力試驗
            2.9 分泌蛋白的檢測
        3 討論
        參考文獻
        ABSTRACT
全文總結(jié)
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3623838