以雞巨噬細(xì)胞（HD11）為柔嫩艾美耳球蟲（Eimeria tenella）的宿主細(xì)胞,將E.tenella子孢子體外接種HD11細(xì)胞,觀察其入侵細(xì)胞、發(fā)育及誘導(dǎo)細(xì)胞抗感染免疫情況。用熒光探針和real-time PCR方法分別檢測細(xì)胞內(nèi)NO和ROS的含量和E.tenella感染相關(guān)的8種宿主細(xì)胞因子（IL-1β、IL-6、IL-10、IL-12p40、IFN-γ、TNF-α、iNOS和IRF7）mRNA水平。結(jié)果顯示,E.tenella子孢子成功入侵HD11細(xì)胞,但并沒有發(fā)育跡象。與不刺激組相比,活子孢子刺激后HD11細(xì)胞內(nèi)NO含量在4 hpi顯著升高,8 hpi達(dá)到最高并且隨時(shí)間變化不再降低,而ROS含量在2 hpi顯著升高,6 hpi達(dá)到最高并且隨時(shí)間變化逐漸降低。與不刺激組相比,活子孢子刺激HD11細(xì)胞IL-1β和iNOS mRNA表達(dá)水平在6 hpi顯著增加（P<0.05）,IL-6、IL-10、IL-12p40、IFN-γ、TNF-α、iNOS和IRF7在10 hpi顯著增加（P<0.05）。與不刺激組相比,熱滅活子孢子刺激后HD11細(xì)胞IL-6和IFN-γmRN... 

【文章來源】：動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2020,41(11)北大核心

【文章頁數(shù)】：8 頁

【部分圖文】：

滅菌的E.tenella孢子化卵囊和純化的子孢子

鑒于文獻(xiàn)報(bào)道[8]稱,E.tenella子孢子在CEK細(xì)胞內(nèi)可以發(fā)育成卵囊,為了對(duì)比觀察子孢子的發(fā)育情況,同時(shí)進(jìn)行E.tenella在CEK細(xì)胞中的培養(yǎng)。無菌純化的E.tenella子孢子接種CEK細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)卵囊,表明E.tenella在CEK細(xì)胞上培養(yǎng)成功。以下僅展示部分特征性變化時(shí)間點(diǎn):在接種48 h時(shí)發(fā)現(xiàn)第1代裂殖體(圖3A);在接種96 h時(shí)發(fā)現(xiàn)第2代裂殖體(圖3B);在接種192 h時(shí)發(fā)現(xiàn)卵囊(圖3C)。2.1.4 接種時(shí)間的確定

為確定子孢子接種HD11細(xì)胞的最佳接種劑量,將不同劑量的E.tenella子孢子接種HD11細(xì)胞,4 h后統(tǒng)計(jì)其入侵率。結(jié)果顯示,當(dāng)子孢子和細(xì)胞比為1∶2時(shí),入侵率很低,觀察非常困難;當(dāng)子孢子和細(xì)胞比為1∶1時(shí),入侵率為31.14%,培養(yǎng)至50 h后細(xì)胞大量脫落;當(dāng)子孢子和細(xì)胞比為1.5∶1時(shí),入侵率為34.98%,培養(yǎng)至48 h后細(xì)胞脫落(圖2);當(dāng)子孢子和細(xì)胞比為大于等于2∶1時(shí),此時(shí)雖然入侵率變化不大(圖5),但是由于子孢子數(shù)量太多,對(duì)細(xì)胞的直接損傷嚴(yán)重,導(dǎo)致培養(yǎng)時(shí)間急劇縮短。結(jié)果表明,子孢子和細(xì)胞比為1.5∶1為最佳接種劑量。圖4 E.tenella子孢子接種HD11細(xì)胞入侵率隨時(shí)間的變化

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]雞白細(xì)胞介素6研究進(jìn)展[J]. 趙娜,李燁初,張小榮,吳艷濤.  上海畜牧獸醫(yī)通訊. 2013(01)

博士論文
[1]柔嫩艾美耳球蟲入侵DF1細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄組學(xué)及蛋白質(zhì)組學(xué)分析[D]. 王秀臻.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2018
[2]結(jié)核分枝桿菌ESX-1分泌蛋白調(diào)控巨噬細(xì)胞功能的研究[D]. 屈野.中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院 2013



本文編號(hào)：3622620