以雞巨噬細胞（HD11）為柔嫩艾美耳球蟲（Eimeria tenella）的宿主細胞,將E.tenella子孢子體外接種HD11細胞,觀察其入侵細胞、發(fā)育及誘導細胞抗感染免疫情況。用熒光探針和real-time PCR方法分別檢測細胞內(nèi)NO和ROS的含量和E.tenella感染相關(guān)的8種宿主細胞因子（IL-1β、IL-6、IL-10、IL-12p40、IFN-γ、TNF-α、iNOS和IRF7）mRNA水平。結(jié)果顯示,E.tenella子孢子成功入侵HD11細胞,但并沒有發(fā)育跡象。與不刺激組相比,活子孢子刺激后HD11細胞內(nèi)NO含量在4 hpi顯著升高,8 hpi達到最高并且隨時間變化不再降低,而ROS含量在2 hpi顯著升高,6 hpi達到最高并且隨時間變化逐漸降低。與不刺激組相比,活子孢子刺激HD11細胞IL-1β和iNOS mRNA表達水平在6 hpi顯著增加（P<0.05）,IL-6、IL-10、IL-12p40、IFN-γ、TNF-α、iNOS和IRF7在10 hpi顯著增加（P<0.05）。與不刺激組相比,熱滅活子孢子刺激后HD11細胞IL-6和IFN-γmRN... 

【文章來源】：動物醫(yī)學進展. 2020,41(11)北大核心

【文章頁數(shù)】：8 頁

【部分圖文】：

滅菌的E.tenella孢子化卵囊和純化的子孢子

鑒于文獻報道[8]稱,E.tenella子孢子在CEK細胞內(nèi)可以發(fā)育成卵囊,為了對比觀察子孢子的發(fā)育情況,同時進行E.tenella在CEK細胞中的培養(yǎng)。無菌純化的E.tenella子孢子接種CEK細胞,發(fā)現(xiàn)卵囊,表明E.tenella在CEK細胞上培養(yǎng)成功。以下僅展示部分特征性變化時間點:在接種48 h時發(fā)現(xiàn)第1代裂殖體(圖3A);在接種96 h時發(fā)現(xiàn)第2代裂殖體(圖3B);在接種192 h時發(fā)現(xiàn)卵囊(圖3C)。2.1.4 接種時間的確定

為確定子孢子接種HD11細胞的最佳接種劑量,將不同劑量的E.tenella子孢子接種HD11細胞,4 h后統(tǒng)計其入侵率。結(jié)果顯示,當子孢子和細胞比為1∶2時,入侵率很低,觀察非常困難;當子孢子和細胞比為1∶1時,入侵率為31.14%,培養(yǎng)至50 h后細胞大量脫落;當子孢子和細胞比為1.5∶1時,入侵率為34.98%,培養(yǎng)至48 h后細胞脫落(圖2);當子孢子和細胞比為大于等于2∶1時,此時雖然入侵率變化不大(圖5),但是由于子孢子數(shù)量太多,對細胞的直接損傷嚴重,導致培養(yǎng)時間急劇縮短。結(jié)果表明,子孢子和細胞比為1.5∶1為最佳接種劑量。圖4 E.tenella子孢子接種HD11細胞入侵率隨時間的變化

【參考文獻】：
期刊論文
[1]雞白細胞介素6研究進展[J]. 趙娜,李燁初,張小榮,吳艷濤.  上海畜牧獸醫(yī)通訊. 2013(01)

博士論文
[1]柔嫩艾美耳球蟲入侵DF1細胞的轉(zhuǎn)錄組學及蛋白質(zhì)組學分析[D]. 王秀臻.山東農(nóng)業(yè)大學 2018
[2]結(jié)核分枝桿菌ESX-1分泌蛋白調(diào)控巨噬細胞功能的研究[D]. 屈野.中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院 2013



本文編號：3622620