基于Cap蛋白的鵝星狀病毒遺傳進化、單抗制備及定量檢測技術(shù)研究
發(fā)布時間：2022-02-12 18:34
自2016年5月以來,安徽、江蘇、山東、云南、四川等養(yǎng)鵝場爆發(fā)一種以痛風為主要病癥的傳染病,該病表現(xiàn)為腿關(guān)節(jié)腔充滿白色漿液及腎臟尿酸鹽沉積導致腎炎,5-19日齡雛鵝易感,死亡率高達30%,給養(yǎng)鵝業(yè)及相關(guān)產(chǎn)業(yè)帶來嚴重經(jīng)濟損失。本研究首先對實驗室對2016-2019年從各地采集的RT-PCR鵝星狀病毒（Goose Astroviruses,GoAstV）陽性臨床發(fā)病鵝樣品,進行回顧性分析,對其中有時間和地區(qū)代表性毒株的ORF1b（編碼RNA依賴性RNA聚合酶蛋白）,ORF2（編碼病毒衣殼蛋白）基因序列比對分析。結(jié)果表明,樣本LA1605,ZJ1703,ZJ1704,ADY1708,LY1912與中國現(xiàn)已發(fā)表的多株鵝星狀病毒基因序列同源性高達99.9%。構(gòu)建GoAstV Cap原核表達載體pET-30a-rCap,轉(zhuǎn)化BL21（DE3）后使用IPTG誘導表達,通過SDS-PAGE和Western blot檢測蛋白的表達,大量表達并純化帶有His標簽的rCap重組蛋白,獲得濃度為0.74 mg/mL的重組蛋白。將純化的蛋白作為免疫原免疫BALB/c小鼠,采用酶聯(lián)免疫吸附試驗（Enzyme li...
【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)科學院北京市
【文章頁數(shù)】：69 頁
【學位級別】：碩士
【圖文】：
星狀病毒基因組結(jié)構(gòu)及衣殼蛋白結(jié)構(gòu)模式圖(Cortezetal.,2017)
圖 2.1 GoAstV ORF1b 基因的 PCR 擴增結(jié)果 M：Trans 2KTM PlusⅡ DNA 標準分子量；1-10：LA1605，ZJ1701，ZJ1702，ZJ1703，ZJ1704，ZJ1705，ADY1708，CZ1712，CX1801，LY1912 毒株 ORF1b 片段；11：陰性對照 Fig.2.1 Amplification of GAstV ORF1b gene Lane M：Trans 2KTM Plus Ⅱ DNA marker； Lane 1-10：LA1605，ZJ1701，ZJ1702，ZJ1703，ZJ1704，ZJ1705，ADY1708，CZ1712，CX1801，LY1912 poison ORF1b gene；11：negative control
中國農(nóng)業(yè)科學院碩士學位論文 第二章 鵝星狀病毒流行病學調(diào)查及遺傳進化分析 2.3 實驗結(jié)果 2.3.1 樣本 PCR 檢測結(jié)果 樣品分別為來自 2016 年 5 月至 2019 年 12 月期間安徽等地區(qū)各養(yǎng)殖場，共有 10 份患病鵝組織樣本。對上述樣本提取 RNA 進行 GoAstV PCR 檢測，PCR 結(jié)果顯示 10 份樣品全部為陽性，PCR產(chǎn)物凝膠電泳圖如下所示（圖 2.1，圖 2.2）。
【參考文獻】：
期刊論文
[1]鵝星狀病毒LAMP快速檢測方法的建立與應用[J]. 張玉霞,楊金興,孟凱,蔡李萌,袁小遠,王友令. 中國預防獸醫(yī)學報. 2019(11)
[2]新型鵝星狀病毒AHQJ18株的分離鑒定[J]. 章麗嬌,黃欣梅,劉飛,劉青濤,韓凱凱,趙冬敏,楊婧,劉宇卓,李銀. 江蘇農(nóng)業(yè)學報. 2019(05)
[3]人星狀病毒1型野毒株的培養(yǎng)及生物學鑒定[J]. 梁雪雪,劉鵬飛,譚李倩,李明,趙微. 中國現(xiàn)代醫(yī)學雜志. 2018(23)
[4]雞星狀病毒研究進展[J]. 武宗儀,孔正茹,秦愛建,錢琨. 中國家禽. 2018(08)
[5]實時熒光定量PCR技術(shù)研究進展及其應用[J]. 王玉倩,薛秀花. 生物學通報. 2016(02)
[6]TaqMan探針法實時熒光定量PCR的應用和研究進展[J]. 姜文燦,岳素文,江洪,王成彬. 臨床檢驗雜志(電子版). 2015(01)
[7]犬細小病毒四川株的分離鑒定與一步生長曲線的測定[J]. 韓燕,朱玲,周遠成,廖春燕,徐志文,郭萬柱. 中國獸醫(yī)學報. 2014(03)
[8]一株新型鴨源呼腸孤病毒（TH11株）的分離與鑒定[J]. 陳宗艷,朱英奇,王世傳,李傳峰,李露,王玢繽,付玉志,高景鵬,王超,劉光清. 中國動物傳染病學報. 2012(01)
[9]實時熒光定量PCR技術(shù)的研究進展及應用[J]. 徐楠楠,胡桂學. 黑龍江畜牧獸醫(yī). 2011(21)
[10]SYBR Green Ⅰ實時熒光定量RT-PCR檢測禽呼腸孤病毒δC和δNS基因方法的建立[J]. 熊文婕,謝芝勛,唐熠,謝麗基,劉加波,龐耀姍,鄧顯文,謝志勤. 廣西農(nóng)業(yè)科學. 2010(04)
本文編號：3622224
【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)科學院北京市
【文章頁數(shù)】：69 頁
【學位級別】：碩士
【圖文】：
星狀病毒基因組結(jié)構(gòu)及衣殼蛋白結(jié)構(gòu)模式圖(Cortezetal.,2017)
圖 2.1 GoAstV ORF1b 基因的 PCR 擴增結(jié)果 M：Trans 2KTM PlusⅡ DNA 標準分子量；1-10：LA1605，ZJ1701，ZJ1702，ZJ1703，ZJ1704，ZJ1705，ADY1708，CZ1712，CX1801，LY1912 毒株 ORF1b 片段；11：陰性對照 Fig.2.1 Amplification of GAstV ORF1b gene Lane M：Trans 2KTM Plus Ⅱ DNA marker； Lane 1-10：LA1605，ZJ1701，ZJ1702，ZJ1703，ZJ1704，ZJ1705，ADY1708，CZ1712，CX1801，LY1912 poison ORF1b gene；11：negative control
中國農(nóng)業(yè)科學院碩士學位論文 第二章 鵝星狀病毒流行病學調(diào)查及遺傳進化分析 2.3 實驗結(jié)果 2.3.1 樣本 PCR 檢測結(jié)果 樣品分別為來自 2016 年 5 月至 2019 年 12 月期間安徽等地區(qū)各養(yǎng)殖場，共有 10 份患病鵝組織樣本。對上述樣本提取 RNA 進行 GoAstV PCR 檢測，PCR 結(jié)果顯示 10 份樣品全部為陽性，PCR產(chǎn)物凝膠電泳圖如下所示（圖 2.1，圖 2.2）。
【參考文獻】：
期刊論文
[1]鵝星狀病毒LAMP快速檢測方法的建立與應用[J]. 張玉霞,楊金興,孟凱,蔡李萌,袁小遠,王友令. 中國預防獸醫(yī)學報. 2019(11)
[2]新型鵝星狀病毒AHQJ18株的分離鑒定[J]. 章麗嬌,黃欣梅,劉飛,劉青濤,韓凱凱,趙冬敏,楊婧,劉宇卓,李銀. 江蘇農(nóng)業(yè)學報. 2019(05)
[3]人星狀病毒1型野毒株的培養(yǎng)及生物學鑒定[J]. 梁雪雪,劉鵬飛,譚李倩,李明,趙微. 中國現(xiàn)代醫(yī)學雜志. 2018(23)
[4]雞星狀病毒研究進展[J]. 武宗儀,孔正茹,秦愛建,錢琨. 中國家禽. 2018(08)
[5]實時熒光定量PCR技術(shù)研究進展及其應用[J]. 王玉倩,薛秀花. 生物學通報. 2016(02)
[6]TaqMan探針法實時熒光定量PCR的應用和研究進展[J]. 姜文燦,岳素文,江洪,王成彬. 臨床檢驗雜志(電子版). 2015(01)
[7]犬細小病毒四川株的分離鑒定與一步生長曲線的測定[J]. 韓燕,朱玲,周遠成,廖春燕,徐志文,郭萬柱. 中國獸醫(yī)學報. 2014(03)
[8]一株新型鴨源呼腸孤病毒（TH11株）的分離與鑒定[J]. 陳宗艷,朱英奇,王世傳,李傳峰,李露,王玢繽,付玉志,高景鵬,王超,劉光清. 中國動物傳染病學報. 2012(01)
[9]實時熒光定量PCR技術(shù)的研究進展及應用[J]. 徐楠楠,胡桂學. 黑龍江畜牧獸醫(yī). 2011(21)
[10]SYBR Green Ⅰ實時熒光定量RT-PCR檢測禽呼腸孤病毒δC和δNS基因方法的建立[J]. 熊文婕,謝芝勛,唐熠,謝麗基,劉加波,龐耀姍,鄧顯文,謝志勤. 廣西農(nóng)業(yè)科學. 2010(04)
本文編號：3622224
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