奶牛乳腺炎是嚴(yán)重危害養(yǎng)牛業(yè)的重要疾病,仍缺乏有效治療手段。乳腺上皮細(xì)胞作為乳腺的第一道防線,其適時(shí)凋亡在奶牛乳腺炎轉(zhuǎn)歸中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。中藥單體靛玉紅作用廣泛,兼具難耐藥、低毒、無殘留等優(yōu)點(diǎn),為奶牛乳腺炎綠色高效防治提供了新思路。本研究旨在探討靛玉紅對脂多糖誘導(dǎo)的小鼠乳腺上皮細(xì)胞凋亡的影響并闡明機(jī)制。通過使用脂多糖刺激小鼠乳腺上皮細(xì)胞建立凋亡模型,并設(shè)置空白對照組、二甲基亞砜組及脂多糖組三個(gè)對照組,使用不同濃度的靛玉紅,在脂多糖誘導(dǎo)前和誘導(dǎo)后實(shí)施干預(yù),從凋亡細(xì)胞形態(tài)、凋亡相關(guān)基因m RNA和蛋白水平,觀察靛玉紅對脂多糖誘導(dǎo)小鼠乳腺上皮細(xì)胞凋亡的影響。結(jié)果,靛玉紅可以劑量依賴性改善脂多糖誘導(dǎo)小鼠乳腺上皮細(xì)胞發(fā)生的凋亡現(xiàn)象,顯著促進(jìn)脂多糖誘導(dǎo)小鼠乳腺上皮細(xì)胞中Bcl-x L、Bcl-2等抗凋亡基因表達(dá),抑制Bak、Bax、Caspase-8和Caspase-3等促凋亡基因和蛋白表達(dá)有關(guān)。上述結(jié)果表明,靛玉紅通過促進(jìn)抗凋亡基因的表達(dá)及抑制促凋亡基因表達(dá),適時(shí)調(diào)控脂多糖誘導(dǎo)的小鼠乳腺上皮細(xì)胞凋亡。 

【文章來源】：中國獸醫(yī)科學(xué). 2020,50(12)北大核心CSCD

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【部分圖文】：

靛玉紅對MMECs凋亡率的影響

中國獸醫(yī)科學(xué)第50卷圖3Western-blot和qRT-PCR檢測靛玉紅對LPS誘導(dǎo)MMECs中Bcl成員表達(dá)的影響Figure3EffectsofindirubinonBclfamilyexpressioninLPS-inducedMMECsbyWesternblotandqRT-PCRA：Western-blot檢測Bcl-2蛋白表達(dá)水平；B：Bcl-2表達(dá)量分析；C：Bcl-2的mRNA表達(dá)水平分析；D：Bcl-xl的mRNA表達(dá)水平；E：Bax的mR-NA表達(dá)水平分析；F：Bak的mRNA表達(dá)水平分析。###P＜0.001，與對照組比較；**P＜0.01，***P＜0.001，與LPS組比較。A：Bcl-2proteinexpressionlevelbyWestern-blot；B：Bcl-2expressionanalysis；C：Bcl-2mRNAexpressionlevelanalysis；D：Bcl-xlmRNAexpres-sionlevelanalysis；E：BaxmRNAexpressionlevelanalysis；F：BakmRNAexpressionlevelanalysis.###P＜0.001comparedwithcontrolgroup；**P＜0.01，***P＜0.001comparedwithLPSgroup.亡形態(tài)改善，隨著靛玉紅使用量的增大，凋亡改善的效果更加明顯。另外，脂多糖和靛玉紅加入順序?qū)Φ蛲鲇绊懖幻黠@，細(xì)胞凋亡形態(tài)差異不大。細(xì)胞形態(tài)變化是細(xì)胞凋亡的主要依據(jù)，凋亡細(xì)胞計(jì)數(shù)統(tǒng)計(jì)凋亡率（圖2）。結(jié)果證明，LPS可誘導(dǎo)MMECs凋亡發(fā)生率增加，靛玉紅可以抑制LPS誘導(dǎo)MMECs凋亡，顯著降低凋亡率，并且呈劑量依賴性。2.2靛玉紅影響B(tài)cl-2家族關(guān)鍵成員分析Bcl-2家族成員在凋亡中扮演著至關(guān)重要的角色。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，LPS可以誘導(dǎo)Bcl-2（圖3A-C）蛋白和mRNA水平下降，以及Bax（圖3E）和Bak（圖3F）的mRNA水平的升高；靛玉紅在蛋白和mRNA水平上增加Bcl-2的活性，并增加了Bcl-xL（圖3D）的mRNA水平表達(dá)，抑制Bax和Bak的mRNA表達(dá)水平，對LPS誘導(dǎo)的MMECs凋亡發(fā)揮抑制效應(yīng)。2.3靛玉紅影響Caspase家族成員活性的分析為了檢測靛玉紅對Caspase家族關(guān)鍵成員活性的影響，采用qRT-PCR和Western-bl

Western-blot和qRT-PCR檢測靛玉紅對LPS誘導(dǎo)MMECs中Caspase-3和Caspase-8的影響

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]白花杜鵑水提液對多房棘球蚴的體外殺滅和體內(nèi)感染療效的研究[J]. 高艷,郝寶成,宋向東,續(xù)文君,李立,閆鴻斌,吳金措姆,拉巴次旦,田波,賈萬忠.  中國獸醫(yī)科學(xué). 2019(10)
[2]6-溴-靛玉紅-3’-肟抑制脂多糖誘導(dǎo)的小鼠乳腺上皮細(xì)胞凋亡[J]. 劉暢,唐鑫,張文勁,趙春陽,郭愛珍,胡長敏.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2018(12)
[3]我國牛源金黃色葡萄球菌耐藥現(xiàn)狀及藥敏檢測方法探討[J]. 王登峰,李建軍,段新華,楊學(xué)云,吳建勇,瑪利亞木,王治才.  中國動(dòng)物傳染病學(xué)報(bào). 2011(01)
[4]中草藥防治奶牛乳房炎[J]. 錢立,丁建平,陶勇,章孝榮,葛凱,姚貴東,谷玉.  動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2006(05)
[5]細(xì)胞凋亡與炎癥[J]. 楊苓山.  國外醫(yī)學(xué)(創(chuàng)傷與外科基本問題分冊). 1997(01)

碩士論文
[1]CTSB、CTSS基因表達(dá)與綿羊卵丘細(xì)胞凋亡及卵母細(xì)胞發(fā)育能力相關(guān)性研究[D]. 常慶玲.河北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014



本文編號：3620007