為建立新的禽白血病診斷方法,以臨床分離得到的JL-2株禽白血病前病毒cDNA為模板,用PCR技術(shù)擴(kuò)增gp37基因,測(cè)序后進(jìn)行序列分析,并構(gòu)建原核表達(dá)質(zhì)粒pET-gp37,在大腸桿菌BL21（DE3）中經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá),SDS-PAGE及Western blot鑒定并純化。結(jié)果顯示:gp37基因全長(zhǎng)591 bp,編碼197個(gè)氨基酸,分子量22 kDa,無信號(hào)肽,為疏水性蛋白;PCR及雙酶切鑒定表明,重組原核表達(dá)質(zhì)粒pET-gp37構(gòu)建成功;經(jīng)SDS-PAGE及Western blot鑒定,表達(dá)蛋白分子質(zhì)量與理論值一致,均為22 kDa,并以可溶形式表達(dá),純化后純度達(dá)98%以上。結(jié)論:成功表達(dá)和純化了gp37蛋白,為預(yù)防禽白血病病毒的感染及建立新的禽白血病診斷方法提供了參考。 

【文章來源】：畜牧與獸醫(yī). 2020,52(10)北大核心

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

pET-gp37 PCR及酶切鑒定

Western blot鑒定結(jié)果

將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物,經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè),在約591 bp處有1條清晰的條帶,與預(yù)期目的條帶大小一致,如圖1。將獲得的gp37目的基因連接至pMD-18-T載體,構(gòu)建成克隆載體質(zhì)粒pMD-gp37,通過PCR及雙酶切鑒定,結(jié)果如圖2 所示,在約591 bp處均有目的片段條帶。2.2 序列分析

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號(hào)：3616282