豬肉是我國居民重要的動物蛋白來源,隨著國民生活水平的不斷提高,人們對豬肉品質(zhì)、產(chǎn)量的要求也越來越高。因此從改善肌肉發(fā)育等性狀的角度來提高豬肉的品質(zhì)和產(chǎn)量成為了豬遺傳改良的重點。目前很多報道都已證實印記基因在骨骼肌的發(fā)育過程中發(fā)揮了不可替代的作用,其中就有H19-IGF2印記基因簇。已有的研究表明H19、IGF2呈反向表達模式,且H19內(nèi)部生成的miR-675能抑制C2C12細胞增殖,siH19和過表達let7都能促進C2C12細胞分化,但目前H19/IGF2印記基因簇調(diào)控骨骼肌發(fā)育的機理還不是很清楚,在豬中未見報道。本研究較系統(tǒng)地揭示了H19、IGF2、miR-675印記簇基因及H19互作的let7家族基因在大白豬、梅山豬骨骼肌組織及成肌細胞C2C12分化過程中的表達規(guī)律,并對C2C12成肌分化過程中H19啟動子甲基化水平、轉(zhuǎn)錄調(diào)控規(guī)律進行了研究。主要取得以下結(jié)果：（1）通過定量的方法證實H19、IGF2在梅山、大白豬骨骼肌發(fā)育中的表達規(guī)律是一致的,H19、IGF2在胚胎50d骨骼肌中的表達水平比95d略低,但胚胎期表達水平都極顯著高于成年期。品種間比較發(fā)現(xiàn),梅山豬胚胎50d和95d骨... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學湖北省211工程院校教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞表
1 前言
    1.1 研究問題的由來
    1.2 豬骨骼肌的發(fā)生發(fā)育過程
    1.3 骨骼肌發(fā)育的分子機理
        1.3.1 與肌肉發(fā)育相關的生肌調(diào)節(jié)因子
        1.3.2 與肌肉發(fā)育相關的信號通路
        1.3.3 miRNA對骨骼肌發(fā)育的重要調(diào)控作用
        1.3.4 印記基因?qū)趋兰“l(fā)育的相關研究
    1.4 H19/IGF2印記基因簇對骨骼肌發(fā)育有重要的調(diào)控作用
    1.5 H19、IGF2的研究進展
        1.5.1 印記基因的表達模式
        1.5.2 甲基化對H19、IGF2的重要調(diào)控作用
        1.5.3 轉(zhuǎn)錄因子對H19的調(diào)控作用
        1.5.4 miRNA對H19調(diào)控研究
    1.6 H19-IGF2印記基因簇內(nèi)其他基因的研究進展
    1.7 本研究的目的與意義
2 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 小鼠、豬組織樣
        2.1.2 菌株和載體
        2.1.3 細胞
        2.1.4 試劑
        2.1.5 主要試劑的配制
        2.1.6 主要分子生物學軟件及數(shù)據(jù)庫
    2.2 方法
        2.2.1 細胞的培養(yǎng)
        2.2.2 miRNAs及基因表達量分析
        2.2.3 啟動子載體的構(gòu)建
        2.2.4 細胞的轉(zhuǎn)染
        2.2.5 細胞的處理與收集
        2.2.6 雙熒光素酶檢測及數(shù)據(jù)分析
        2.2.7 甲基化檢測及數(shù)據(jù)分析
    2.3 本研究的技術(shù)路線
3 結(jié)果
    3.1 H19、IGF2以及l(fā)et7家族在大白、梅山豬三個時期中的組織表達規(guī)律檢測
    3.2 let7家族與H19以及pH值的相關性研究結(jié)果
    3.3 在小鼠中H19、miR-675-3p組織表達譜
    3.4 H19-IGF2印記基因簇相關基因在C2C12細胞分化過程中的表達情況
    3.5 H19啟動子轉(zhuǎn)錄活性檢測
        3.5.1 H19轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點在線軟件預測
        3.5.2 H19啟動子載體構(gòu)建及雙熒光活性檢測
    3.6 H19基因DMR區(qū)甲基化水平分析
        3.6.1 H19基因CpG島的在線預測
        3.6.2 H19基因上游CTCF結(jié)合位點的確定
        3.6.3 H19基因DMR區(qū)測序分析
        3.6.4 卡方檢驗在各時間點C2C12細胞中4個CTCF位點的甲基化差異情況
4 討論
    4.1 關于H19基因在組織、細胞中的表達
    4.2 關于H19-IGF2基因簇相關基因?qū)19的調(diào)控作用
    4.3 關于miRNA對H19的調(diào)控研究
    4.4 關于H19在C2C12細胞中的轉(zhuǎn)錄調(diào)控研究
5 小結(jié)
    5.1 本研究的主要結(jié)果
    5.2 本研究的創(chuàng)新點和特色
    5.3 本研究的不足及下一步工作建議
參考文獻
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]H19基因研究進展[J]. 張小剛,安利國,鄭曉飛.  軍事醫(yī)學. 2011(06)
[2]TGF-β/肌肉生長抑制素信號通路對骨骼肌作用的研究進展[J]. 張菊香,張鵬,陳曉萍.  航天醫(yī)學與醫(yī)學工程. 2011(03)
[3]let-7 microRNA調(diào)控動物器官發(fā)育的研究進展[J]. 王虹,滕鴻琦,施玨平,張彥定,張明鳳.  生命科學. 2011(04)
[4]JAK2/STAT3信號通路對小鼠骨骼肌發(fā)育和能量代謝相關基因mRNA表達的影響[J]. 馬佩云,孫超,張忠品,張朝,齊仁立.  農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學報. 2010(05)
[5]哺乳動物印記域DLK1-DIO3的研究進展[J]. 趙麗霞,趙高平,周歡敏.  遺傳. 2010(08)

碩士論文
[1]Wnt/β-catenin信號通路調(diào)控豬骨骼肌纖維類型變化的初步研究[D]. 楊秋梅.西北農(nóng)林科技大學 2011



本文編號：3614915