為探究小鼠睪丸組織中維生素D受體（VDR）對硬脂酰輔酶A去飽和酶1（SCD-1）基因表達的影響,首先對6月齡、12月齡野生型和VDR敲除型小鼠睪丸組織進行轉(zhuǎn)錄組測序分析,發(fā)現(xiàn)VDR敲除后SCD-1基因表達顯著降低,并通過RT-qPCR對轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果進行驗證。隨后構(gòu)建了融合表達載體pEGFP-VDR,在293T細(xì)胞中檢測VDR的定位。接著將pEGFP-VDR和pCDNA3.1-VDR重組質(zhì)粒以及VDR特異性siRNA分別轉(zhuǎn)染至睪丸間質(zhì)細(xì)胞TM3,利用RT-qPCR和Western blot檢測過表達和干擾VDR表達對SCD-1表達的影響。結(jié)果顯示,VDR敲除后,睪丸組織中SCD-1的表達量在6月齡和12月齡小鼠中均極顯著下降;EGFP的核內(nèi)分布因核轉(zhuǎn)錄因子VDR介導(dǎo)的作用明顯多于細(xì)胞質(zhì);TM3細(xì)胞中過表達VDR對SCD-1基因表達無顯著差異,干擾VDR后,SCD-1轉(zhuǎn)錄水平顯著下降,但蛋白水平差異不顯著。據(jù)此認(rèn)為,正常水平的VDR對于SCD-1基因表達和功能維持是必要的, VDR缺失會嚴(yán)重影響SCD-1的功能,研究結(jié)果為VDR調(diào)控SCD-1基因表達研究奠定了基礎(chǔ),為VDR與脂代謝及雄性... 

【文章來源】：動物醫(yī)學(xué)進展. 2020,41(12)北大核心

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

pEGFP-VDR融合表達載體構(gòu)建與鑒定

pEGFP-VDR融合表達載體驗證

TM3細(xì)胞為睪丸間質(zhì)細(xì)胞,負(fù)責(zé)合成分泌雄性激素,促進精子發(fā)生和雄性生殖器官發(fā)育,故以其為研究對象,分別進行了VDR過表達和干擾試驗,分析調(diào)控VDR對SCD-1基因表達的影響(圖4和5)。采用pCDNA3.1-VDR和pEGFP-VDR 2個VDR過表達載體進行分析,是為了確認(rèn)EGFP和VDR融合后是否影響VDR功能。RT-qPCR和Western blot結(jié)果顯示,pEGFP-VDR和pCDNA3.1-VDR均在TM3細(xì)胞中實現(xiàn)VDR的過表達(圖4A、B和C)。在確認(rèn)VDR過表達后,進行了SCD-1的表達水平檢測,結(jié)果發(fā)現(xiàn),在TM3細(xì)胞中過表達VDR后,SCD-1 mRNA和蛋白水平均略有上升,但與對照組相比無顯著性差異(圖4D、E和4F)。本研究設(shè)計3條VDR si-RNA進行VDR干擾試驗,發(fā)現(xiàn)si-VDR-Mus-1379、si-VDR-Mus-991和si-VDR-Mus-1204的干擾效率分別為47.7%、40%及18%(圖5A),干擾效率最高的si-VDR-Mus-991組VDR蛋白表達水平下降24%((圖5B、圖5C)。對VDR干擾效率較好的2組細(xì)胞進行SCD-1表達水平分析,發(fā)現(xiàn)si-VDR-Mus-1379組水平顯著下降,si-VDR-Mus-991組水平下降極顯著(圖5D),對si-VDR-Mus-991組SCD-1蛋白水平檢測發(fā)現(xiàn),蛋白表達降低,但與對照組比較差異不顯著(圖5E、圖5F)。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]維生素D受體研究進展[J]. 楊偉杰,趙偉鑫,劉永亮,魏攀鵬,侯文博,王珊,苗志國.  河南科技學(xué)院學(xué)報(自然科學(xué)版). 2019(05)
[2]組織腎素-血管緊張素系統(tǒng)、維生素D受體和Wnt/β-catenin在慢性病中交互作用的研究進展[J]. 李文雄,丁凡,王擁軍,施杞,張巖.  中國藥理學(xué)通報. 2019(10)
[3]維生素D受體在腫瘤中作用的研究進展[J]. 田思宇,李志偉,蔡望偉.  心理月刊. 2019(09)
[4]維生素D受體基因多態(tài)性與骨質(zhì)疏松癥相關(guān)性的研究進展[J]. 李明,李寧寧.  右江醫(yī)學(xué). 2019(04)
[5]維生素D受體基因敲除小鼠品系的建立與鑒定[J]. 趙家榮,劉歡,張濤,王令,路宏朝,杜偉立.  中國實驗動物學(xué)報. 2018(06)
[6]秀麗線蟲硬脂酰輔酶A去飽和酶的研究進展[J]. 胡英,肖麗霞,梁斌.  生物物理學(xué)報. 2015(01)

碩士論文
[1]VDR對雄性小鼠生殖與脂代謝影響及相關(guān)基因表達調(diào)控研究[D]. 劉歡.陜西理工大學(xué) 2019



本文編號：3614512