為構(gòu)建豬趨化因子受體1（CCR1）、趨化因子受體5（CCR5）真核表達(dá)載體并分析其信號(hào)通路,在細(xì)胞水平上初步探究了CC型趨化因子（RANTES）與CCR1和CCR5之間的關(guān)系,并建立CCR1和CCR5細(xì)胞模型并優(yōu)化篩選條件,為篩選基于受體CCR1和CCR5的先導(dǎo)化合物防控相關(guān)豬病奠定基礎(chǔ)。本文利用PCR技術(shù)從豬的肌肉組織中擴(kuò)增出1062bp的CCR1基因片段和1059bp的CCR5基因片段。將豬CCR1和CCR5基因連接到真核表達(dá)載體pcDNA3.1（+）并獲得重組質(zhì)粒pcDNA3.1（+）-myc/CCR1和pcDNA3.1（+）-myc/CCR5。將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到HEK293T細(xì)胞中,通過RT-PCR技術(shù)和Western blotting技術(shù)鑒定目的基因的轉(zhuǎn)錄和翻譯。將重組質(zhì)粒分別與pGL4.29[1uc2P/CRE/Hygro]或pGL4.33[luc2P/SRE/Hygro]和pGL4.74[hRluc/TK]共轉(zhuǎn)染到HEK293T細(xì)胞中,通過雙熒光素酶報(bào)告基因法,使用微孔板多功能熒光素酶檢測(cè)儀檢測(cè)RANTES作用后熒光素酶的表達(dá)量。分別轉(zhuǎn)染pcDNA3.1（+）-myc/CC... 

【文章來源】：中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)獸醫(yī)藥理毒理學(xué)分會(huì)第十一屆會(huì)員代表大會(huì)暨第十三次學(xué)術(shù)討論會(huì)與中國(guó)毒理學(xué)會(huì)獸醫(yī)毒理專業(yè)委員會(huì)第五次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)會(huì)議論文集

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