蜱（Tick）傳播疾病病原能力世界第二，是最重要的人畜共患病傳播媒介之，特別是森林腦炎、新疆出血熱、萊姆病、Q熱等人畜共患病，嚴(yán)重威脅著世界人類健康和畜牧業(yè)的發(fā)展。因此，蜱的安全、無污染、有效防治成為畜牧業(yè)生產(chǎn)中急待解決的問題，因此研發(fā)新的防控制劑成為必然趨勢。目前以免疫學(xué)為基礎(chǔ)的疫苗防控逐漸成為最有前景的防治蜱方法之，而這防治途徑的關(guān)鍵在于蜱功能基因的鑒定。本研究對免疫學(xué)方法篩選文庫得到的長角血蜱（Haemaphysalislongicornis）原肌球蛋白（HL-Tm）和肌球蛋白堿性輕鏈（HL-MALC）兩個功能基因進(jìn)行生物信息學(xué)分析，隨后進(jìn)行克隆和原核表達(dá)，分別采用SDS-PAGE和Western-blot分析目的蛋白的表達(dá)情況和反應(yīng)原性。采用實時定量PCR技術(shù)分析其在長角血蜱п同發(fā)育階段及п同組織中的分布，以及通過動物免疫及攻蜱試驗和RNAi試驗來評估其作為控蜱免疫疫苗候選抗原的可行性。為深入探索蜱生理功能調(diào)控機(jī)制、評估新型環(huán)境友好害蟲防控制劑和抗蜱疫苗候選抗原奠定基礎(chǔ)，補(bǔ)充我國在防控蜱新制劑研究和蜱生理行為干預(yù)方面的空白。本論文研究結(jié)果如н：將HL-MALC基因和HL-Tm基... 

【文章來源】：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)甘肅省

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略表
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 蜱的概況
        1.1.1 蜱蟲形態(tài)特征
        1.1.2 生長發(fā)育
    1.2 傳播疾病
        1.2.1 森林腦炎
        1.2.2 新疆出血熱
        1.2.3 萊姆病
        1.2.4 Q 熱
    1.3 蜱肌肉的組成
        1.3.1 肌球蛋白
            1.3.1.1 肌球蛋白性質(zhì)
            1.3.1.2 肌球蛋白功能
        1.3.2 原肌球蛋白
        1.3.3 肌動蛋白
        1.3.4 肌鈣蛋白
    1.4 蜱類肌肉相關(guān)蛋白的研究進(jìn)展
        1.4.1 長角血蜱的肌肉相關(guān)蛋白研究進(jìn)展
        1.4.2 青海血蜱的肌肉相關(guān)蛋白研究進(jìn)展
        1.4.3 扇頭蜱肌肉相關(guān)蛋白的研究進(jìn)展
    1.5 其他節(jié)肢動物肌肉相關(guān)蛋白的研究進(jìn)展
        1.5.1 甲殼綱肌肉相關(guān)蛋白的研究進(jìn)展
        1.5.2 蛛形綱肌肉相關(guān)蛋白的研究進(jìn)展
        1.5.3 多足綱肌肉相關(guān)蛋白的研究進(jìn)展
        1.5.4 昆蟲綱肌肉相關(guān)蛋白的研究進(jìn)展
    1.6 本研究的目的及意義
第二章 HL-Tm 和 HL-MALC 基因的生物信息學(xué)分析
    2.1 材料方法
        2.1.1 生物信息學(xué)方法分析目的基因的全序列
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 HL-Tm 基因全長的獲得及生物信息學(xué)分析
        2.2.2 HL-MALC 基因全長的獲得及生物信息學(xué)分析
    2.3 討論
第三章 HL-Tm 和 HL-MALC 基因的原核表達(dá)及其反應(yīng)原性初步鑒定
    3.1 材料
        3.1.1 蜱、實驗動物
        3.1.2 試劑
        3.1.3 儀器設(shè)備
    3.2 方法
        3.2.1 引物設(shè)計
        3.2.2 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)
        3.2.3 HL-Tm 和 HL-MALC 基因的克隆以及測序
        3.2.4 重組表達(dá)載體的構(gòu)建和 PCR 鑒定
        3.2.5 重組載體的原核表達(dá)
        3.2.6 MagneGSTTM 小量純化蛋白
        3.2.7 Westernblot 檢測
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 長角血蜱基因 Tm 和 MALC 基因的 ORF 擴(kuò)增結(jié)果
        3.3.2 HL-Tm 和 HL-MALC 基因表達(dá)產(chǎn)物及純化的重組蛋白質(zhì)的 SDS-PAGE 分析
        3.3.3 Western-blotting 分析表達(dá)產(chǎn)物
    3.4 討論
第四章 HL-Tm 基因和 HL-MALC 基因在長角血蜱不同發(fā)育階段和組織的轉(zhuǎn)錄
    4.1 材料
        4.1.1 蜱、組織收集、總 RNA 的提取和 cDNA 合成
        4.1.2 試劑
        4.1.3 儀器設(shè)備
    4.2 HL-Tm 基因和 HL-MALC 基因在長角血蜱不同發(fā)育階段和組織的轉(zhuǎn)錄
        4.2.1 熒光相對定量 PCR 引物
        4.2.2 相對定量分析目的基因在長角血蜱п同發(fā)育階段和組織中的轉(zhuǎn)錄
    4.3 結(jié)果
        4.3.1 相對定量分析 HL-Tm 基因在п同組織、п同發(fā)育階段的轉(zhuǎn)錄
        4.3.2 相對定量分析 HL-MALC 基因在п同組織、п同發(fā)育階段的轉(zhuǎn)錄
    4.4 討論
第五章 HL-Tm 和 HL-MALC 基因的動物免疫及攻蜱實驗和 RNAi 實驗
    5.1 材料
        5.1.1 蜱、組織收集、總 RNA 的提取和 cDNA 合成
        5.1.2 試劑
        5.1.3 儀器設(shè)備
    5.2 方法
        5.2.1 融合蛋白的大量純化
        5.2.2 蛋白免疫及攻蜱試驗
        5.2.3 RNAi 實驗
            5.2.3.1 Liner DNA template 的擴(kuò)增
            5.2.3.2 ds RNA 的制備
            5.2.3.3 ds RNA 的顯微注射
            5.2.3.4 接種至兔體飼血
            5.2.3.5 干擾效果分析
            5.2.3.6 干擾后蜱的沉默效果
    5.3 結(jié)果
        5.3.1 rHL-Tm 免疫和攻蜱實驗
        5.3.2 rHL- MALC 免疫和攻蜱實驗
        5.3.3 RNAi 試驗結(jié)果
            5.3.3.1 dsRNA 的合成
            5.3.3.2 RNA 干擾后目的基因的沉默效果評價
            5.3.3.3 HL-Tm 沉默后對長角血蜱生物學(xué)特性的影響
            5.3.3.4 HL-MALC 沉默后對長角血蜱生物學(xué)特性的影響
    5.4 討論
全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡歷
附錄


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]中秋蠶飼養(yǎng)管理技術(shù)[J]. 謝文革.  現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技. 2013(04)
[2]浙江省蜱媒傳染病監(jiān)測研究[J]. 凌鋒,龔震宇,柴程良,林君芬,孫繼民,侯娟,吳海霞,劉起勇.  中國媒介生物學(xué)及控制雜志. 2013(01)
[3]蜱及蜱傳病的研究進(jìn)展[J]. 劉琪,王偉利,孟慶峰.  安徽農(nóng)業(yè)科學(xué). 2013(03)
[4]斑馬魚原肌球蛋白基因克隆表達(dá)及免疫學(xué)鑒定[J]. 李荔,陳櫻麟,閆浩,劉志剛.  水產(chǎn)科學(xué). 2013(01)
[5]甲狀腺激素、肌鈣蛋白Ⅰ和B型鈉尿肽在急性冠狀動脈綜合征患者中的變化及預(yù)后評價[J]. 唐新,李永姝,賈克剛.  檢驗醫(yī)學(xué). 2012(12)
[6]萊姆病螺旋體優(yōu)勢抗原BmpA分子克隆、高效表達(dá)與亞細(xì)胞地位[J]. 寶福凱,賴名耀,文霞,董堅,柳愛華,陳明清.  中國病原生物學(xué)雜志. 2012(11)
[7]心力衰竭治療前后心肌酶和肌鈣蛋白T及C反應(yīng)蛋白水平變化分析[J]. 葛曉麗.  中國全科醫(yī)學(xué). 2012(20)
[8]實驗室條件下小亞璃眼蜱生活史觀察[J]. 孫明,曾巧英,殷宏,關(guān)貴全,劉志杰,任巧云,羅建勛.  中國媒介生物學(xué)及控制雜志. 2011(04)
[9]長角血蜱新基因HL05全長序列的克隆與原核表達(dá)[J]. 張麗艷,劉光遠(yuǎn),田占成,謝俊仁,龔真莉,劉建剛.  中國獸醫(yī)科學(xué). 2011(04)
[10]中國蜱傳病主要流行趨勢及防控科技對策[J]. 馬廣鵬,孫傳范,趙娜,張西臣.  中國農(nóng)業(yè)科技導(dǎo)報. 2011(02)

碩士論文
[1]動物蜱形態(tài)學(xué)鑒定核糖體及線粒體DNA多態(tài)性研究[D]. 馬君.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011



本文編號：3610880