Wnt信號(hào)通路能影響毛囊細(xì)胞的生成、發(fā)育、增殖與分化等作用,進(jìn)而影響絨毛生長周期以及毛乳頭細(xì)胞增殖,Wnt10b基因?yàn)閃nt/β-catenin信號(hào)通路中重要信號(hào)因子之一,對(duì)絨毛生長調(diào)控的研究具有重要意義;大量研究表明,褪黑素能夠調(diào)控毛囊周期性生長,但其調(diào)控機(jī)理尚不清楚。本研究是在課題前期組轉(zhuǎn)錄組測(cè)序的基礎(chǔ)上,篩選出受褪黑素影響的毛囊生長相關(guān)的β-catenin、FGF21、Lef1、SFRP1基因,研究通過絨山羊皮膚上皮細(xì)胞培養(yǎng)、Wnt10b基因干擾、qRT-PCR以及western-blot等技術(shù)檢測(cè)Wnt10b基因在褪黑素調(diào)控絨毛周期生長中的作用機(jī)制。研究結(jié)果如下:（1）本研究根據(jù)添加褪黑激素濃度不同設(shè)置四個(gè)試驗(yàn)組,分別為對(duì)照組（0 pg/mL）、100pg/mL、300pg/mL、600pg/mL 以及 900pg/mL 處理絨山羊上皮細(xì)胞,利用cck-8法檢測(cè)各組皮膚上皮細(xì)胞增殖情況。結(jié)果表明:300pg/mL褪黑素濃度對(duì)皮膚上皮細(xì)胞增殖效應(yīng)最佳（P<0.05）。（2）根據(jù)山羊Wnt10b基因序列,構(gòu)建三種干擾質(zhì)粒片段并融入質(zhì)粒載體,shRNA-Wnt10b-CDS1、... 

【文章來源】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)內(nèi)蒙古自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１內(nèi)蒙古絨山羊皮膚上皮細(xì)胞??Ｆｉｇ?．１?Ｉｎｎｅｒ?Ｍｏｎｇｏｌｉａ?Ｃａｓｈｍｅｒｅ?Ｇｏａｔ?Ｓｋｉｎ?Ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ?Ｃｅｌｌｓ??

Ｍ?ＷｎｔｌＯｂ基因在褪黑素調(diào)控絨毛周期生長中作用機(jī)制的研究???圖１內(nèi)蒙古絨山羊皮膚上皮細(xì)胞??Ｆｉｇ?．１?Ｉｎｎｅｒ?Ｍｏｎｇｏｌｉａ?Ｃａｓｈｍｅｒｅ?Ｇｏａｔ?Ｓｋｉｎ?Ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ?Ｃｅｌｌｓ??２．３．２細(xì)胞生長曲線??圖２可見細(xì)胞生長曲線“Ｓ”型明顯，１－４天為潛伏期，５－７天呈指數(shù)型生長，??第８天后達(dá)到平臺(tái)期，說明細(xì)胞生長狀態(tài)良好，可用于傳達(dá)培養(yǎng)使用。??上皮細(xì)胞生長曲線??１．４?「－?－?－?－?－?；?－??—?—?？?－?．??１－２?ｊ?＊??０－８?Ｉ?／??ｇ?０．６?！?／??〇．４?丨■?ｒ??０２〇?！?＾?；＿??０?２?４?６?８??天數(shù)??圖２內(nèi)蒙古絨山羊皮膚上皮細(xì)胞生長曲線??Ｆｉｇ．２?Ｇｒｏｗｔｈ?Ｃｕｒｖｅ?ｏｆ?Ｉｎｎｅｒ?Ｍｏｎｇｏｌｉａ?Ｃａｓｈｍｅｒｅ?Ｇｏａｔ?Ｓｋｉｎ?Ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ?Ｃｅｌｌｓ??２．３．３細(xì)胞復(fù)蘇??原代細(xì)胞大量增殖后，一部分用于試驗(yàn)，一部分凍存保留用于后續(xù)試驗(yàn)補(bǔ)充，??圖３為凍存細(xì)胞復(fù)蘇后狀態(tài)，細(xì)胞復(fù)蘇后因小部分細(xì)胞結(jié)構(gòu)受損無法貼壁，剩余??細(xì)胞正常貼壁后繼續(xù)増殖，復(fù)蘇后貼壁２４小時(shí)后棄去就培養(yǎng)液和懸浮未貼壁細(xì)??胞，添加新培養(yǎng)液繼續(xù)生長，待細(xì)胞生長密集后傳代，傳代１－２代后，細(xì)胞生長??狀態(tài)回復(fù)正常細(xì)胞狀態(tài)。??

圖３復(fù)蘇的內(nèi)蒙古域山羊皮膚上皮細(xì)胞??Ｆｉｇ．３?Ｒｅｓｕｓｃｉｔａｔｅｄ?Ｉｎｎｅｒ?Ｍｏｎｇｏｌｉａ?Ｃａｓｈｍｅｒｅ?Ｇｏａｔ?Ｓｋｉｎ?Ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ?Ｃｅｌｌｓ??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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[8]褪黑素刺激對(duì)內(nèi)蒙古絨山羊毛囊干細(xì)胞增殖和分化的影響及機(jī)理研究[D]. 曹春花.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[9]利用RNA干擾技術(shù)研究RORα對(duì)褪黑激素促進(jìn)絨毛生長相關(guān)基因表達(dá)的影響[D]. 張鐵佳.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
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本文編號(hào)：3608898