Wnt信號通路能影響毛囊細胞的生成、發(fā)育、增殖與分化等作用,進而影響絨毛生長周期以及毛乳頭細胞增殖,Wnt10b基因為Wnt/β-catenin信號通路中重要信號因子之一,對絨毛生長調(diào)控的研究具有重要意義;大量研究表明,褪黑素能夠調(diào)控毛囊周期性生長,但其調(diào)控機理尚不清楚。本研究是在課題前期組轉(zhuǎn)錄組測序的基礎(chǔ)上,篩選出受褪黑素影響的毛囊生長相關(guān)的β-catenin、FGF21、Lef1、SFRP1基因,研究通過絨山羊皮膚上皮細胞培養(yǎng)、Wnt10b基因干擾、qRT-PCR以及western-blot等技術(shù)檢測Wnt10b基因在褪黑素調(diào)控絨毛周期生長中的作用機制。研究結(jié)果如下:（1）本研究根據(jù)添加褪黑激素濃度不同設(shè)置四個試驗組,分別為對照組（0 pg/mL）、100pg/mL、300pg/mL、600pg/mL 以及 900pg/mL 處理絨山羊上皮細胞,利用cck-8法檢測各組皮膚上皮細胞增殖情況。結(jié)果表明:300pg/mL褪黑素濃度對皮膚上皮細胞增殖效應(yīng)最佳（P<0.05）。（2）根據(jù)山羊Wnt10b基因序列,構(gòu)建三種干擾質(zhì)粒片段并融入質(zhì)粒載體,shRNA-Wnt10b-CDS1、... 

【文章來源】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)內(nèi)蒙古自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１內(nèi)蒙古絨山羊皮膚上皮細胞??Ｆｉｇ?．１?Ｉｎｎｅｒ?Ｍｏｎｇｏｌｉａ?Ｃａｓｈｍｅｒｅ?Ｇｏａｔ?Ｓｋｉｎ?Ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ?Ｃｅｌｌｓ??

Ｍ?ＷｎｔｌＯｂ基因在褪黑素調(diào)控絨毛周期生長中作用機制的研究???圖１內(nèi)蒙古絨山羊皮膚上皮細胞??Ｆｉｇ?．１?Ｉｎｎｅｒ?Ｍｏｎｇｏｌｉａ?Ｃａｓｈｍｅｒｅ?Ｇｏａｔ?Ｓｋｉｎ?Ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ?Ｃｅｌｌｓ??２．３．２細胞生長曲線??圖２可見細胞生長曲線“Ｓ”型明顯，１－４天為潛伏期，５－７天呈指數(shù)型生長，??第８天后達到平臺期，說明細胞生長狀態(tài)良好，可用于傳達培養(yǎng)使用。??上皮細胞生長曲線??１．４?「－?－?－?－?－?；?－??—?—?？?－?．??１－２?ｊ?＊??０－８?Ｉ?／??ｇ?０．６?！?／??〇．４?丨■?ｒ??０２〇?！?＾?；＿??０?２?４?６?８??天數(shù)??圖２內(nèi)蒙古絨山羊皮膚上皮細胞生長曲線??Ｆｉｇ．２?Ｇｒｏｗｔｈ?Ｃｕｒｖｅ?ｏｆ?Ｉｎｎｅｒ?Ｍｏｎｇｏｌｉａ?Ｃａｓｈｍｅｒｅ?Ｇｏａｔ?Ｓｋｉｎ?Ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ?Ｃｅｌｌｓ??２．３．３細胞復(fù)蘇??原代細胞大量增殖后，一部分用于試驗，一部分凍存保留用于后續(xù)試驗補充，??圖３為凍存細胞復(fù)蘇后狀態(tài)，細胞復(fù)蘇后因小部分細胞結(jié)構(gòu)受損無法貼壁，剩余??細胞正常貼壁后繼續(xù)増殖，復(fù)蘇后貼壁２４小時后棄去就培養(yǎng)液和懸浮未貼壁細??胞，添加新培養(yǎng)液繼續(xù)生長，待細胞生長密集后傳代，傳代１－２代后，細胞生長??狀態(tài)回復(fù)正常細胞狀態(tài)。??

圖３復(fù)蘇的內(nèi)蒙古域山羊皮膚上皮細胞??Ｆｉｇ．３?Ｒｅｓｕｓｃｉｔａｔｅｄ?Ｉｎｎｅｒ?Ｍｏｎｇｏｌｉａ?Ｃａｓｈｍｅｒｅ?Ｇｏａｔ?Ｓｋｉｎ?Ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ?Ｃｅｌｌｓ??

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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[6]褪黑激素調(diào)節(jié)動物毛皮發(fā)育的作用及其機制[D]. 馬文杰.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2018
[7]基于RNA-seq分析褪黑素對內(nèi)蒙古絨山羊毛囊發(fā)育相關(guān)基因表達的影響[D]. 王巖.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017
[8]褪黑素刺激對內(nèi)蒙古絨山羊毛囊干細胞增殖和分化的影響及機理研究[D]. 曹春花.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
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本文編號：3608898