根據(jù)GenBank公布的Nc-livepoor的基因序列,分析Nc-livepoor免疫蛋白的優(yōu)勢線性抗原表位,依據(jù)分析結(jié)果選取Nc-Liverpool的優(yōu)勢抗原表位集中片段進(jìn)行串聯(lián),構(gòu)建合成Me-Nc-MLiverpool基因。將該基因克隆至pET-30a（+）質(zhì)粒中構(gòu)建重組蛋白質(zhì)粒pET-30a-Me-Nc-MLiverpool原核表達(dá)載體,再進(jìn)行IPTG誘導(dǎo)表達(dá)、分析和純化及SDS-PAGE和Western blot驗(yàn)證。以0.75 mg/mL的SPA做金標(biāo)抗原,用純化后濃度為1 mg/mL的重組蛋白和牛IgG分別做檢測線和質(zhì)控線,建立了檢測新孢子蟲抗體的膠體金免疫層析檢測方法（CGIA）。重組質(zhì)粒pET-30a-Me-Nc-MLiverpool雙酶切驗(yàn)證結(jié)果顯示,在636 bp的位置有條帶,說明重組質(zhì)粒構(gòu)建成功。SDS-PAGE結(jié)果顯示,重組蛋白大小為39.32 ku;Western blot結(jié)果顯示,該重組蛋白可與新孢子蟲陽性血清特異性識別,表明重組蛋白有較強(qiáng)的反應(yīng)原性;特異性試驗(yàn)結(jié)果顯示,新孢子蟲CGIA與弓形蟲、肝片吸蟲、包蟲陽性血清不發(fā)生交叉反應(yīng);敏感性分析顯示,GIC... 

【文章來源】：動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2020,41(11)北大核心

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

重組蛋白Nc-livepoor的SDS-PAGE分析

Nc-livepoor重組蛋白Western blot的分析

表2 最佳SPA蛋白濃度的確定Table 2 Determination of optimum SPA protein concentration in colloidal gold solution 項(xiàng)目 Item SPA蛋白濃度/(mg·mL-1) SPA protein concentration 0 0.25 0.50 0.75 1.00 1.25 1.50 2.00 OD值 OD value 0.166 0.201 0.233 0.255 0.259 0.235 0.247 0.290 最佳蛋白濃度/(mg·mL-1) Optimal protein concentration 0.75圖7 CGIA特異性試驗(yàn)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]雞白痢沙門氏菌膠體金免疫層析快速檢測試紙條的研制及初步應(yīng)用[J]. 劉志科,楊寧寧,徐明國,荊明龍,曹旭東,陳創(chuàng)夫.  河南科技學(xué)院學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2018(01)
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[5]基于Nc-5基因的新孢子蟲病PCR診斷方法的建立[J]. 柴方紅,賈立軍,張守發(fā).  畜牧與獸醫(yī). 2011(12)

博士論文
[1]梅花鹿感染犬新孢子蟲雙抗夾心Dot-ELISA檢測方法的建立及應(yīng)用[D]. 田來明.吉林大學(xué) 2015

碩士論文
[1]犬新孢子蟲檢測方法的建立及應(yīng)用[D]. 馬文晨.吉林大學(xué) 2018
[2]新孢子蟲病原分離鑒定及免疫化學(xué)檢測方法的建立[D]. 王琪.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017



本文編號：3605265