都柏林沙門氏菌（S. dublin）是引起犢牛副傷寒的主要病原菌之一。犢牛副傷寒以頑固性下痢為典型癥狀,常引起犢牛大規(guī)模發(fā)病,死亡率較高,給養(yǎng)牛業(yè)造成了重大損失。同時(shí),受感染的動物、污染牛肉或消毒不徹底的牛奶及奶制品,是引發(fā)人食物中毒的重要的感染源。因此,其在獸醫(yī)和公共衛(wèi)生方面均具有非常重要的意義。疫苗接種是預(yù)防犢牛副傷寒的最佳手段。在我國,唯一的牛副傷寒活疫苗是將抗原性良好的都柏林沙門氏菌強(qiáng)毒株利用醋酸砣致弱法選育出的免疫原性良好的弱毒株。此疫苗采用化學(xué)誘變致弱,具有致弱的遺傳背景不夠清楚、存在毒力返強(qiáng)的風(fēng)險(xiǎn)與保留部分殘留毒力的缺點(diǎn)。本研究旨在研制更加安全有效、遺傳背景清晰、有明確的標(biāo)記來區(qū)分疫苗接種與野毒感染的新的都柏林沙門氏菌基因缺失減毒疫苗,為犢牛副傷寒病的防控奠定一定的理論和試驗(yàn)基礎(chǔ)。主要內(nèi)容如下：1. S. dublin AphoQ單缺失株和△phoQ-△rpoS雙缺失株的構(gòu)建基于phoQ、rpoS基因的已知序列,利用λ噬菌體Red重組系統(tǒng)依次對都柏林沙門氏菌CICC21497的phoQ、rpoS基因進(jìn)行缺失,構(gòu)建出△phoQ單缺失株和△phoQ-△rpoS雙缺失株,并利用... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞(Abbreviation)
1 前言
    1.1 研究問題的由來
    1.2 文獻(xiàn)綜述
        1.2.1 都柏林沙門氏菌病的研究概況
        1.2.2 沙門氏菌疫苗研究進(jìn)展
        1.2.3 Red同源重組技術(shù)
    1.3 研究的目的與意義
2 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 菌株、質(zhì)粒和細(xì)胞系
        2.1.2 藥品與試劑
        2.1.3 主要培養(yǎng)基及其配制
        2.1.4 主要試劑與緩沖液的配制
        2.1.5 本實(shí)驗(yàn)所用PCR引物
        2.1.6 實(shí)驗(yàn)動物
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 都柏林沙門氏菌缺失株的構(gòu)建
        2.2.2 都柏林沙門氏菌缺失株生物學(xué)特性鑒定
        2.2.3 都柏林沙門氏菌缺失株對小鼠的毒力實(shí)驗(yàn)
        2.2.4 都柏林沙門氏菌缺失株粘附力與侵襲力鑒定
        2.2.5 都柏林沙門氏菌缺失株對小鼠的免疫原性實(shí)驗(yàn)
        2.2.6 都柏林沙門氏菌缺失株對小鼠的免疫保護(hù)實(shí)驗(yàn)
        2.2.7 都柏林沙門氏菌缺失株對小鼠的交叉保護(hù)實(shí)驗(yàn)
        2.2.8 菌株與樹突狀細(xì)胞的相互作用
        2.2.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
3 結(jié)果與分析
    3.1 都柏林沙門氏菌ΔphoQ單缺失株、ΔphoQ-ΔrpoS雙缺失株的構(gòu)建
        3.1.1 同源臂構(gòu)建
        3.1.2 PCR鑒定質(zhì)粒pKD46轉(zhuǎn)入目的菌株
        3.1.3 第一次同源重組菌ΔphoQ::cat、ΔphoQ-ΔrpoS::cat的PCR鑒定
        3.1.4 第二次重組菌ΔphoQ、ΔphoQ-ΔrpoS的鑒定
    3.2 都柏林沙門氏菌缺失株生物學(xué)特性鑒定
        3.2.1 都柏林沙門氏菌缺失株生長特性鑒定
        3.2.2 都柏林沙門氏菌缺失株生化特性鑒定
    3.3 都柏林沙門氏菌缺失株對小鼠的毒力試驗(yàn)
    3.4 都柏林沙門氏菌缺失株對HEp-2細(xì)胞的粘附與侵襲
        3.4.1 都柏林沙門氏菌缺失株對HEp-2細(xì)胞的粘附
        3.4.2 都柏林沙門氏菌缺失株對HEp-2細(xì)胞的侵襲
    3.5 都柏林沙門氏菌缺失株免疫原性檢測
        3.5.1 都柏林沙門氏菌IgG抗體水平檢測
        3.5.2 血清中細(xì)胞因子的檢測
        3.5.3 沙門氏菌菌體抗原刺激淋巴細(xì)胞增殖分析
        3.5.4 免疫小鼠的CD4~+T細(xì)胞水平分析
    3.6 都柏林沙門氏菌缺失株免疫保護(hù)試驗(yàn)
    3.7 缺失株的交叉保護(hù)試驗(yàn)
    3.8 不同菌株與樹突狀細(xì)胞的相互作用
        3.8.1 感染不同菌株后樹突狀細(xì)胞分泌IFN-γ的檢測
        3.8.2 感染不同菌株后樹突狀細(xì)胞分泌TNF-α的檢測
        3.8.3 感染不同菌株后樹突狀細(xì)胞分泌IL-10的檢測
        3.8.4 感染不同菌株后樹突狀細(xì)胞分泌IL-12p70的檢測
        3.8.5 感染不同菌株后樹突狀細(xì)胞分泌IL-23的檢測
4 討論
    4.1 Red重組系統(tǒng)的應(yīng)用
    4.2 phoQ、rpoS缺失對毒力的影響
    4.3 phoQ、rpoS缺失對免疫原性的影響
    4.4 缺失株的交叉保護(hù)力
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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本文編號：3605093