CRISPR/Cpf1是2015年張峰小組報(bào)道的新型CRISPR系統(tǒng),研究證實(shí)該系統(tǒng)具有更簡單、更精準(zhǔn)實(shí)現(xiàn)基因組編輯的潛能。解旋酶DDX21不僅能夠參與信使RNA（Messenger RNA,mRNA）前體加工、RNA的轉(zhuǎn)運(yùn)和降解、核糖體的生成等多種生物學(xué)過程,而且在禽流感病毒（Avian influenza virus,AIV）、登革熱病毒（Dengue virus,DENV）、人類免疫缺陷病毒（Human Immunodeficiency Virus,HIV）等病毒的增殖及信號(hào)傳導(dǎo)過程中也發(fā)揮了重要作用。本研究首先利用CRISPR/Cpf1技術(shù)敲除哺乳動(dòng)物HEK293細(xì)胞DDX21基因并感染H9N2亞型AIV,在細(xì)胞水平驗(yàn)證了CRISPR/Cpf1系統(tǒng)的活性及DDX21介導(dǎo)AIV感染的天然免疫應(yīng)答機(jī)制;進(jìn)一步探索了CRISPR/Cpf1慢病毒系統(tǒng)在雞DF-1細(xì)胞和雞體上的基因編輯,為揭示DDX21基因功能、病毒致病機(jī)制研究奠定了基礎(chǔ)。CRISPR/Cpf1系統(tǒng)編輯哺乳動(dòng)物細(xì)胞:以DDX21為靶向基因,利用在線軟件chopchop篩選靶位點(diǎn),分別構(gòu)建pU6-Lb-crRNA-DDX2... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

CRISPR/Cas系統(tǒng)的組成及分類Fig.1.1ThecompositionandclassificationofCRISPR/Cassystem圖A為1類CRISPR/Cas系統(tǒng)（Makarovaetal.,2017）;圖B為2類CRISPR/Cas系統(tǒng)（Makarovaetal.,2017b）

學(xué)院碩士學(xué)位論文 第一ISPR/Cas 系統(tǒng)作用機(jī)制同類型的 CRISPR/Cas 系統(tǒng)在發(fā)揮功能時(shí)所涉及的 Cas 蛋白的種類和數(shù)目不的 CRISPR 系統(tǒng)，其抵御外來遺傳物質(zhì)入侵的免疫防御過程都可分為 3 個(gè)階段nd Wiedenheft, 2015）：外源 DNA 獲取 當(dāng)噬菌體和質(zhì)粒 DNA 首次入侵時(shí)，Cas1 和 Cas2 形成蛋白列的緊鄰基序(protospacer adjacent motif,PAM)，從外源 DNA 中獲取序列原acer），插入到兩段重復(fù)序列中形成新的間隔序列；crRNA 的加工 前導(dǎo)區(qū)激活 CRISPR 序列的轉(zhuǎn)錄，生成單鏈的前體 RNA(pre-酸酶和（或）Cas 蛋白進(jìn)一步加工形成成熟的 crRNA；靶向干擾 當(dāng)外源 DNA 再次進(jìn)入宿主細(xì)菌時(shí)，成熟的 crRNA 與相應(yīng)特異性，識(shí)別與 crRNA 互補(bǔ)的外源 DNA，引起 DNA 雙鏈斷裂（Double-strand break重組或非同源末端連接修復(fù)方式，造成靶基因的刪除（knock out，KO）、敲入堿基或序列的突變，從而實(shí)現(xiàn)靶基因的精準(zhǔn)修飾。

中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 第一章 引言（續(xù)表1-1）類型 CRISPR/Cas9 CRISPR/Cpf1Pre-crRNA加工方式 需要Cas9及RNAse III等加工成熟 由Cpf1加工成熟Guide RNA crRNA，tracrRNA crRNAPAM序列 G-rich，5'-NGG-3' T-rich，5'-KYIV-3'，5'-TTTN-3'DNA剪切復(fù)合體 Cas9-crRNA-tracrRNA(sgRNA-Cas9)核糖核蛋白復(fù)合體Cpf1-crRNA核糖核蛋白復(fù)合體DNA識(shí)別位點(diǎn) 前間隔序列5′端的PAM序列 前間隔序列3′端的PAM序列末端類型 平末端 粘性末端A B

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3603274