本研究通過豬小腸上皮細(xì)胞（intestinal epithelial cells, IEC）的體外培養(yǎng),建立體外IEC模型,旨在從細(xì)胞水平、基因轉(zhuǎn)錄和蛋白表達(dá)三個(gè)層面研究不同濃度神經(jīng)肽Y（neuropeptide Y,NPY）對豬IEC中Ⅱb型鈉磷轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（sodium dependent phosphate cotransporter II b, NaPi-II b）表達(dá)及小腸無機(jī)磷（inorganic phosphorus, Pi）吸收的影響,闡釋NPY調(diào)控Pi吸收的機(jī)理,為進(jìn)一步研究動(dòng)物Pi吸收和調(diào)控機(jī)制提供試驗(yàn)依據(jù)。試驗(yàn)設(shè)有6個(gè)處理,對照組未加NPY,其他處理組添加不同濃度的NPY（10-11mol/L10-10mol/L、10-9mol/L、10-8mol/L和10-7mol/L）,每個(gè)處理設(shè)有6-8個(gè)重復(fù),通過噻唑藍(lán)（3-（4,5-Dimethylthiazol-2-yl）-2,5-diphenyltetrazolium bromide, MTT）比色法檢測小腸上皮細(xì)胞的增殖情況,通過磷檢測試劑盒采用磷鉬酸法測定細(xì)胞上清液Pi含量的變化,采用熒光定量PCR技術(shù)檢測IEC中N... 

【文章來源】：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)湖南省

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

動(dòng)物體內(nèi)憐的吸收代謝模式圖

與小鼠NaPi-IIa同源性在85?97%之間（Hartmann等，1996)，而與斑馬魚同源性只有47% (Nalbant等，1999)。NaPi-IIa和NaPi-IIb的進(jìn)化關(guān)系和序列同源性見圖1.3。NaPi-II型蛋白家族由溶質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（solme carriers, SLC )編碼，SLC34A1、SLC34A2 和 SLC34A3 基因分別編碼NaPi- II a.NaPi- II b 和 NaPi- II c 蛋白（Villa-Bellosta等，2009; Patti等，2013; Forster等，2013)。NaPi-II型蛋白在憐主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)過程中表達(dá)活性最強(qiáng)（1\401^￡:06等，2007;：6丨卜6〖等,2013)。NaPi-IIb蛋白主要在動(dòng)物小腸中表達(dá)，調(diào)節(jié)小腸BBMV對無機(jī)憐的吸收（Wang等，2009); NaPi-IIa蛋白和NaPi-IIc蛋白主要在腎臟中表達(dá)（Forster等

位于2173bp位點(diǎn)。后又采用SWISS-MODEL在線工具對NaPi-lib蛋白三級結(jié)構(gòu)進(jìn)行了預(yù)測分析，提出了 NaPi-lib蛋白可能的三維結(jié)構(gòu)模式如圖1.4所示。圖1.4豬NaPi-nb預(yù)測蛋白三維結(jié)構(gòu)模式圖（引自項(xiàng)智鋒，2013)Fig. 1.4 The 3 d institutions structure analysis of predicted swine NaPi-11 b protein.1.3 NaPi-IIb蛋白與磷吸收的關(guān)系NaPi-IIb蛋白在維持動(dòng)物機(jī)體憐穩(wěn)態(tài)上起著關(guān)鍵性作用（Ohi等，2011;曹滿湖，2009),為了確定NaPi-IIb蛋白在小腸憐吸收和機(jī)體隣平衡中所扮演的角色，Sabbagh等（2009)用NaPi-lib基因敲除小鼠（Npt2b—)作為試驗(yàn)?zāi)Ｐ�，結(jié)果發(fā)現(xiàn)Npt2b-'?小鼠增加了糞便中憐的排泄，而血清中憐含量保持不變；降低了尿中憐的排泄，減少血清中FGF23的水平（Tomoe等

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3601153