JEV來(lái)源sRNA的鑒定與功能分析
發(fā)布時(shí)間：2022-01-20 14:41
乙型腦炎病毒（Japanese encephalitis virus,JEV）屬于黃病毒科黃病毒屬病毒,它能入侵中樞神經(jīng)系統(tǒng),造成神經(jīng)炎癥反應(yīng),導(dǎo)致人和動(dòng)物發(fā)病甚至死亡,是一種危害嚴(yán)重的人獸共患病病原。sRNA（Small RNA）是一類(lèi)長(zhǎng)度上為約18-30nt的調(diào)控性RNA分子,主要包括微小RNA（miRNA）、干擾小RNA（siRNA）、核仁小RNA（snoRNA）、Piwi蛋白互作RNA（piRNA）等。sRNA幾乎普遍存在于所有生命體中,并在細(xì)胞增殖、分化和凋亡、癌癥以及病毒感染中起重要作用。但目前對(duì)乙型腦炎病毒sRNA的研究報(bào)道較少,病毒編碼sRNA的功能及其在病毒與宿主相互聯(lián)系中所起的作用尚不清楚,因此研究JEV來(lái)源的sRNA對(duì)深入理解其致病機(jī)制具有重要意義。本研究具體內(nèi)容如下:通過(guò)RT-PCR和IFA鑒定,利用BHK-21和C6/36細(xì)胞從上海市嘉定區(qū)豬場(chǎng)蚊媒樣品中成功分離出1株JEV,命名為JD-15株。該毒株源自中華按蚊,用JD-15株分別感染BHK-21和C6/36細(xì)胞,72h后所有細(xì)胞均發(fā)生明顯病變,其病毒滴度為1.96×106 PFU/0....
【文章來(lái)源】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市
【文章頁(yè)數(shù)】：72 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
JEV病毒粒子三維結(jié)構(gòu)示意圖(Wangetal.,2017)
圖 1.2 JEV 3'端非編碼區(qū)順式作用元件示意圖(Yun et al., 2009)Fig.1.2 Schematic representation of the JEV 3’NCR Cis-acting element.(Yun et al., 2009)1.2.3 乙型腦炎病毒的復(fù)制周期病毒的復(fù)制周期起始于與受體的相互作用，乙型腦炎上已發(fā)現(xiàn)許多分子受體，如牛乳鐵蛋白能通過(guò)阻斷分子受體硫酸乙酰肝素進(jìn)而降低 BHK-21 細(xì)胞中 JEV 的入侵（Chien et al., 2008），而在 C6/36 細(xì)胞中熱休克蛋白 70（HSP70）被鑒定為 JEV 的受體（Ren et al., 2007），因此在不同細(xì)胞環(huán)境下病毒可能與許多不同蛋白復(fù)合物互作而并非單一受體。病毒吸附后通過(guò)受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用內(nèi)化，被轉(zhuǎn)運(yùn)至早期內(nèi)體。在內(nèi)體中低 pH 值環(huán)境導(dǎo)致 E 蛋白構(gòu)象發(fā)生變化，導(dǎo)致病毒膜與細(xì)胞膜之間發(fā)生膜融合，接著病毒脫殼其衣殼釋放到細(xì)胞質(zhì)中發(fā)生解離，然后病毒基因組釋放（Bressanelli et al., 2004）。單鏈正義基因組 RNA 作為模板被翻譯成一個(gè)多聚蛋白，該蛋白靶向內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，并由多種蛋白酶加工形成結(jié)構(gòu)蛋白和參與復(fù)制的非結(jié)構(gòu)蛋白。非結(jié)構(gòu)蛋白 NS3 和 NS5 與各種宿主因子一起構(gòu)成病毒復(fù)制復(fù)合物，其中非結(jié)構(gòu)蛋白 NS3 誘導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)相關(guān)的膜網(wǎng)絡(luò)的形成為復(fù)制提供場(chǎng)所，而具有RNA依賴(lài)的RNA聚合酶活性的NS5蛋白能催化復(fù)制（Brinton et al., 2002）。為了保證參與復(fù)制的病毒 RNA 分子是全長(zhǎng) RNA，病毒基因組會(huì)發(fā)生環(huán)化，這是一種由 5’NCR和 3’NCR 的反向互補(bǔ)性介導(dǎo)的長(zhǎng)鏈 RNA 相互作用（Hahn et al.,1987）。正鏈 RNA 模板在病毒復(fù)
圖 1.3 JEV 復(fù)制周期示意圖（Fernandez-Garcia et al., 2009）Fig.1.3 Schematic representation of the JEV replication cycle（Fernandez-Garcia et al., 2009） 乙型腦炎病毒編碼蛋白的功能C 蛋白大小在 13KDa 左右，是病毒的核衣殼蛋白，能包裹病毒 RNA，從而保護(hù)病毒核的結(jié)構(gòu)與黃病毒屬其他成員具有較高的相似性，尤其是西尼羅熱病毒（West nile virus, kland et al., 2004）。該蛋白上有核定位信號(hào)，分布于 JEV 感染細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核 位甘氨酸或 43 位脯氨酸位點(diǎn)能減弱 JEV 對(duì)小鼠的致病性（Mori et al., 2005）。prM 蛋白是 M 蛋白的前體蛋白，在病毒粒子成熟過(guò)程中，prM 蛋白與 E 蛋白相互作聚體，接著 prM 蛋白被位于反式高爾基體的弗林蛋白酶或相關(guān)蛋白酶切割水解形成 M prM 蛋白 C 端的相鄰跨膜結(jié)構(gòu)域，能幫助自身進(jìn)行膜定位，并協(xié)助 E 蛋白進(jìn)行膜轉(zhuǎn)運(yùn), 2011）。prM 蛋白作為 E 蛋白的分子伴侶能協(xié)助其折疊（Zai et al., 2013）。prM 蛋白的與病毒的釋放有關(guān)，但具體機(jī)制尚不清楚（Kim et al., 2008）。E 蛋白分子量大小約 53KDa，同病毒的吸附、融合、血凝性、細(xì)胞嗜性和病毒毒力相中和抗體（Lin et al., 2003）。E 蛋白具有三個(gè)結(jié)構(gòu)域，中心結(jié)構(gòu)域 I（DI）、延伸結(jié)構(gòu)I）和球狀結(jié)構(gòu)域 III（DIII）。DI 位于中間，由九鏈 β 桶組成，具有血凝活性及一些抗原
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]miRNA定量檢測(cè)方法的研究進(jìn)展[J]. 藍(lán)琳,喻芬,黃明敏,孟祥賢. 生命科學(xué)研究. 2018(06)
[2]豬乙型腦炎病毒SCYA201201株感染小鼠后突破血腦屏障能力研究[J]. 柴春霞,王僑,賴(lài)雅蘭,徐伊璇,文心田,曹三杰,黃小波,文翼平,趙勤,伍銳. 浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2018(06)
[3]中華按蚊源日本腦炎病毒的分離鑒定及其分子特征的分析[J]. 劉茜倩,魏建超,鐘登科,吳亞玲,石坤,張克龍,陸美林,肖長(zhǎng)廣,李蓓蓓,劉珂,邵東華,邱亞峰,石元元,馬志永,范紅結(jié). 中國(guó)獸醫(yī)科學(xué). 2017(01)
[4]傳播動(dòng)物蟲(chóng)媒病的蚊種分類(lèi)及其在我國(guó)的分布[J]. 劉建利,花群俊,楊云慶,楊俊興,祝賀,唐金明. 中國(guó)動(dòng)物檢疫. 2015(03)
[5]microRNA定量檢測(cè)方法的研究進(jìn)展[J]. 祝申蓉,吳旭日,陳依軍. 中國(guó)藥科大學(xué)學(xué)報(bào). 2015(01)
[6]上海市蚊媒種類(lèi)、分布及其病原[J]. 周正斌,呂山,張儀,顧文彪,郭云海,蔣明,張臣臣. 中國(guó)媒介生物學(xué)及控制雜志. 2015(01)
[7]基于莖環(huán)引物定量檢測(cè)miRNA的研究進(jìn)展[J]. 宋偉,萬(wàn)百惠,王靜,董平,梁興國(guó). 食品工業(yè)科技. 2014(19)
[8]我國(guó)流行性乙型腦炎發(fā)病的聚類(lèi)分析及其未來(lái)發(fā)病趨勢(shì)預(yù)測(cè)[J]. 劉潔,何欽成. 中國(guó)媒介生物學(xué)及控制雜志. 2013(02)
[9]Identification of circulating miRNA biomarkers based on global quantitative real-time PCR profiling[J]. Kang Kang 1,2 , Xiao Peng 1 , Jun Luo 2 and Deming Gou 11 College of Life Science, Shenzhen University, Shenzhen, Guangdong, 518060, China. 2 College of Animal Science and Technology, Northwest A&F University, Yangling, Shaanxi, 712100, China.. Journal of Animal Science and Biotechnology. 2012(02)
[10]流行性乙型腦炎病原生態(tài)學(xué)的研究概況[J]. 鄧緒芳,史子學(xué),邱亞峰,沈陽(yáng),邵東華,馬志永. 動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2011(02)
博士論文
[1]JE疫苗突變株生物學(xué)特性及鴨坦布蘇病毒流行株基因特征研究[D]. 王經(jīng)滿(mǎn).南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015
碩士論文
[1]河南省乙型腦炎病毒的分離鑒定及分子特性分析[D]. 楊猛.河南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
本文編號(hào)：3599006
【文章來(lái)源】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市
【文章頁(yè)數(shù)】：72 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
JEV病毒粒子三維結(jié)構(gòu)示意圖(Wangetal.,2017)
圖 1.2 JEV 3'端非編碼區(qū)順式作用元件示意圖(Yun et al., 2009)Fig.1.2 Schematic representation of the JEV 3’NCR Cis-acting element.(Yun et al., 2009)1.2.3 乙型腦炎病毒的復(fù)制周期病毒的復(fù)制周期起始于與受體的相互作用，乙型腦炎上已發(fā)現(xiàn)許多分子受體，如牛乳鐵蛋白能通過(guò)阻斷分子受體硫酸乙酰肝素進(jìn)而降低 BHK-21 細(xì)胞中 JEV 的入侵（Chien et al., 2008），而在 C6/36 細(xì)胞中熱休克蛋白 70（HSP70）被鑒定為 JEV 的受體（Ren et al., 2007），因此在不同細(xì)胞環(huán)境下病毒可能與許多不同蛋白復(fù)合物互作而并非單一受體。病毒吸附后通過(guò)受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用內(nèi)化，被轉(zhuǎn)運(yùn)至早期內(nèi)體。在內(nèi)體中低 pH 值環(huán)境導(dǎo)致 E 蛋白構(gòu)象發(fā)生變化，導(dǎo)致病毒膜與細(xì)胞膜之間發(fā)生膜融合，接著病毒脫殼其衣殼釋放到細(xì)胞質(zhì)中發(fā)生解離，然后病毒基因組釋放（Bressanelli et al., 2004）。單鏈正義基因組 RNA 作為模板被翻譯成一個(gè)多聚蛋白，該蛋白靶向內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，并由多種蛋白酶加工形成結(jié)構(gòu)蛋白和參與復(fù)制的非結(jié)構(gòu)蛋白。非結(jié)構(gòu)蛋白 NS3 和 NS5 與各種宿主因子一起構(gòu)成病毒復(fù)制復(fù)合物，其中非結(jié)構(gòu)蛋白 NS3 誘導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)相關(guān)的膜網(wǎng)絡(luò)的形成為復(fù)制提供場(chǎng)所，而具有RNA依賴(lài)的RNA聚合酶活性的NS5蛋白能催化復(fù)制（Brinton et al., 2002）。為了保證參與復(fù)制的病毒 RNA 分子是全長(zhǎng) RNA，病毒基因組會(huì)發(fā)生環(huán)化，這是一種由 5’NCR和 3’NCR 的反向互補(bǔ)性介導(dǎo)的長(zhǎng)鏈 RNA 相互作用（Hahn et al.,1987）。正鏈 RNA 模板在病毒復(fù)
圖 1.3 JEV 復(fù)制周期示意圖（Fernandez-Garcia et al., 2009）Fig.1.3 Schematic representation of the JEV replication cycle（Fernandez-Garcia et al., 2009） 乙型腦炎病毒編碼蛋白的功能C 蛋白大小在 13KDa 左右，是病毒的核衣殼蛋白，能包裹病毒 RNA，從而保護(hù)病毒核的結(jié)構(gòu)與黃病毒屬其他成員具有較高的相似性，尤其是西尼羅熱病毒（West nile virus, kland et al., 2004）。該蛋白上有核定位信號(hào)，分布于 JEV 感染細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核 位甘氨酸或 43 位脯氨酸位點(diǎn)能減弱 JEV 對(duì)小鼠的致病性（Mori et al., 2005）。prM 蛋白是 M 蛋白的前體蛋白，在病毒粒子成熟過(guò)程中，prM 蛋白與 E 蛋白相互作聚體，接著 prM 蛋白被位于反式高爾基體的弗林蛋白酶或相關(guān)蛋白酶切割水解形成 M prM 蛋白 C 端的相鄰跨膜結(jié)構(gòu)域，能幫助自身進(jìn)行膜定位，并協(xié)助 E 蛋白進(jìn)行膜轉(zhuǎn)運(yùn), 2011）。prM 蛋白作為 E 蛋白的分子伴侶能協(xié)助其折疊（Zai et al., 2013）。prM 蛋白的與病毒的釋放有關(guān)，但具體機(jī)制尚不清楚（Kim et al., 2008）。E 蛋白分子量大小約 53KDa，同病毒的吸附、融合、血凝性、細(xì)胞嗜性和病毒毒力相中和抗體（Lin et al., 2003）。E 蛋白具有三個(gè)結(jié)構(gòu)域，中心結(jié)構(gòu)域 I（DI）、延伸結(jié)構(gòu)I）和球狀結(jié)構(gòu)域 III（DIII）。DI 位于中間，由九鏈 β 桶組成，具有血凝活性及一些抗原
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]miRNA定量檢測(cè)方法的研究進(jìn)展[J]. 藍(lán)琳,喻芬,黃明敏,孟祥賢. 生命科學(xué)研究. 2018(06)
[2]豬乙型腦炎病毒SCYA201201株感染小鼠后突破血腦屏障能力研究[J]. 柴春霞,王僑,賴(lài)雅蘭,徐伊璇,文心田,曹三杰,黃小波,文翼平,趙勤,伍銳. 浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2018(06)
[3]中華按蚊源日本腦炎病毒的分離鑒定及其分子特征的分析[J]. 劉茜倩,魏建超,鐘登科,吳亞玲,石坤,張克龍,陸美林,肖長(zhǎng)廣,李蓓蓓,劉珂,邵東華,邱亞峰,石元元,馬志永,范紅結(jié). 中國(guó)獸醫(yī)科學(xué). 2017(01)
[4]傳播動(dòng)物蟲(chóng)媒病的蚊種分類(lèi)及其在我國(guó)的分布[J]. 劉建利,花群俊,楊云慶,楊俊興,祝賀,唐金明. 中國(guó)動(dòng)物檢疫. 2015(03)
[5]microRNA定量檢測(cè)方法的研究進(jìn)展[J]. 祝申蓉,吳旭日,陳依軍. 中國(guó)藥科大學(xué)學(xué)報(bào). 2015(01)
[6]上海市蚊媒種類(lèi)、分布及其病原[J]. 周正斌,呂山,張儀,顧文彪,郭云海,蔣明,張臣臣. 中國(guó)媒介生物學(xué)及控制雜志. 2015(01)
[7]基于莖環(huán)引物定量檢測(cè)miRNA的研究進(jìn)展[J]. 宋偉,萬(wàn)百惠,王靜,董平,梁興國(guó). 食品工業(yè)科技. 2014(19)
[8]我國(guó)流行性乙型腦炎發(fā)病的聚類(lèi)分析及其未來(lái)發(fā)病趨勢(shì)預(yù)測(cè)[J]. 劉潔,何欽成. 中國(guó)媒介生物學(xué)及控制雜志. 2013(02)
[9]Identification of circulating miRNA biomarkers based on global quantitative real-time PCR profiling[J]. Kang Kang 1,2 , Xiao Peng 1 , Jun Luo 2 and Deming Gou 11 College of Life Science, Shenzhen University, Shenzhen, Guangdong, 518060, China. 2 College of Animal Science and Technology, Northwest A&F University, Yangling, Shaanxi, 712100, China.. Journal of Animal Science and Biotechnology. 2012(02)
[10]流行性乙型腦炎病原生態(tài)學(xué)的研究概況[J]. 鄧緒芳,史子學(xué),邱亞峰,沈陽(yáng),邵東華,馬志永. 動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2011(02)
博士論文
[1]JE疫苗突變株生物學(xué)特性及鴨坦布蘇病毒流行株基因特征研究[D]. 王經(jīng)滿(mǎn).南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015
碩士論文
[1]河南省乙型腦炎病毒的分離鑒定及分子特性分析[D]. 楊猛.河南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
本文編號(hào)：3599006
本文鏈接：http://sikaile.net/yixuelunwen/dongwuyixue/3599006.html
最近更新
教材專(zhuān)著
