肌肉和脂肪是影響豬肌肉品質(zhì)重要因素,提高肌肉品質(zhì)是育種工作者的重要目標(biāo)之一,隨著分子生物學(xué)的發(fā)展,豬的育種技術(shù)已從常規(guī)育種逐漸向分子育種的方向過渡。因此,了解影響豬肌肉和脂肪組織的相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)理,有助于為分子育種打下良好的基礎(chǔ)。為此,我們做了如下研究：（1）通過5’RACE鑒定了豬BMP-3b基因的轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn),發(fā)現(xiàn)該基因的轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)翻譯起始位點(diǎn)上游278bp處的鳥嘌呤,并將其定為+1。（2）通過NCBI和EBI獲得了豬BMP-3b基因5’端上游調(diào)控序列,我們克隆了該基因5’端上游調(diào)控序列1458bp。利用生物信息學(xué)的方法預(yù)測(cè)了豬BMP-3b基因5’端上游調(diào)控區(qū)域,發(fā)現(xiàn)了TATA-box和GC-box,預(yù)測(cè)到了多個(gè)與脂肪相關(guān)的C/EBP轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)。并比較不同物種的近端啟動(dòng)區(qū),發(fā)現(xiàn)在-51--36bp處高度保守,該區(qū)域位于兩個(gè)GC-box中。（3）構(gòu)建了8段5’端系列缺失片段的雙熒光素酶報(bào)告基因載體,并在3種真核細(xì)胞系中檢測(cè)了它們的熒光活性,并對(duì)活性較高的PF2段缺失又進(jìn)行了5段缺失,同樣檢測(cè)它們的熒光活性,發(fā)現(xiàn)在-46--39可能是該基因的核心區(qū)域。（4）通過點(diǎn)突變的方... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：70 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 前言
    2 豬脂肪相關(guān)基因的研究進(jìn)展
        2.1 二�；视王；D(zhuǎn)移酶1
        2.2 激素敏感性脂肪酶
        2.3 脂蛋白酯酶基因
        2.4 過氧化物酶體增殖物激活受體γ
    3 啟動(dòng)子的結(jié)構(gòu)功能研究
        3.1 啟動(dòng)子基本結(jié)構(gòu)
        3.2 真核生物啟動(dòng)子預(yù)測(cè)相關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)
        3.3 真核生物啟動(dòng)子功能研究
    4 DNA甲基化
        4.1 表觀遺傳學(xué)的相關(guān)研究
        4.2 DNA甲基化的修飾模式
        4.3 DNA甲基化的檢測(cè)方法
    5 BMP-3b基因研究進(jìn)展
    6 研究的目的和意義
第二章 實(shí)驗(yàn)材料和方法
    1 試驗(yàn)材料
        1.1 主要的生化試劑和藥品
        1.2 細(xì)胞、菌株和載體及豬基因組DNA
        1.3 試劑盒
        1.4 組織表達(dá)譜分析的樣品
        1.5 DNA甲基化分析的樣品
        1.6 主要的儀器、設(shè)備及耗材
        1.7 緩沖液和常用試劑的配制
        1.8 主要的生物學(xué)軟件和網(wǎng)站
    2 試驗(yàn)方法
        2.1 豬BMP-3b基因5’端上游調(diào)控區(qū)域的克隆和分析
        2.2 豬BMP-3b基因轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)的鑒定
        2.3 豬BMP-3b基因近端啟動(dòng)子缺失分析
        2.4 核心啟動(dòng)區(qū)的進(jìn)一步尋找和驗(yàn)證
        2.5 定點(diǎn)突變的驗(yàn)證試驗(yàn)
        2.6 豬BMP-3b基因組織表達(dá)譜分析
        2.7 核心啟動(dòng)區(qū)甲基化研究
        2.8 BMP-3b超表達(dá)實(shí)驗(yàn)
第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
    1 豬BMP-3b基因啟動(dòng)子核心位點(diǎn)的尋找
        1.1 豬BMP-3b基因5’端上游調(diào)控區(qū)域克隆和分析
        1.2 豬BMP-3b基因轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)的鑒定
        1.3 豬BMP-3b基因5’端上游調(diào)控區(qū)域的生物信息學(xué)分析
        1.4 不同物種BMP-3b基因近端啟動(dòng)子序列比對(duì)
        1.5 豬BMP-3b基因5’端上游調(diào)控區(qū)域的缺失載體的構(gòu)建
        1.6 啟動(dòng)子在三種不同真核細(xì)胞中活性分析結(jié)果
        1.7 細(xì)致缺失載體的構(gòu)建
        1.8 細(xì)致缺失片段在PK細(xì)胞中的活性分析
        1.9 點(diǎn)突變分析的驗(yàn)證
    2 豬BMP-3b基因組織表達(dá)譜分析
        2.1 RNA的提取
        2.2 第一鏈cDNA檢測(cè)結(jié)果
        2.3 豬BMP-3b基因在豬不同組織中的表達(dá)結(jié)果
    3 核心啟動(dòng)區(qū)甲基化分析
        3.1 豬BMP-3b基因啟動(dòng)子和外顯子CpG島預(yù)測(cè)
        3.2 核心啟動(dòng)區(qū)的甲基化擴(kuò)增結(jié)果
        3.3 甲基化測(cè)序結(jié)果與分析
        3.4 豬BMP-3b基因核心啟動(dòng)區(qū)不同時(shí)期的甲基化情況
        3.5 豬BMP-3b基因組織表達(dá)與甲基化相關(guān)性分析
    4 豬BMP-3b的超表達(dá)實(shí)驗(yàn)
        4.1 不同物種BMP-3b基因氨基酸序列比對(duì)
        4.2 豬BMP-3b基因CDS全長(zhǎng)的克隆及雙酶切鑒定
        4.3 PCDNA3.1-CDS在PK細(xì)胞中的轉(zhuǎn)染
        4.4 熒光定量PCR檢測(cè)結(jié)果
第四章 討論
    1 關(guān)于豬BMP-3b基因生物信息學(xué)與轉(zhuǎn)錄調(diào)控分析
        1.1 豬BMP-3b基因序列分析
        1.2 豬BMP-3b基因啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄調(diào)控分析
    2 豬BMP-3b基因啟動(dòng)子甲基化與組織表達(dá)譜分析
    3 豬BMP-3b基因的超表達(dá)實(shí)驗(yàn)分析
第五章 小結(jié)
    1 本實(shí)驗(yàn)得到的結(jié)論
    2 下一步工作設(shè)想
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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