睪丸支持細胞（sertoli cell）被認為是生精細胞的支架細胞，能夠為生精細胞提供必需的營養(yǎng)物質，并且合成和分泌雄激素結合蛋白，為生精細胞提供高濃度的雄激素環(huán)境，對精子發(fā)生發(fā)揮著重要的作用。因此，研究睪丸支持細胞的體外培養(yǎng)與生物學特性，不僅對支持細胞潛在的功能研究提供基礎，而且對雄性不育、器官移植以及轉基因動物生產(chǎn)等問題的解決開辟了廣闊的前景。本研究首先利用組合酶消化法分離出犢牛睪丸支持細胞，并采用差速貼壁法對支持細胞進行純化，進一步通過免疫細胞化學和分子標記檢測技術對支持細胞純度進行了鑒定；對不同血清濃度條件下支持細胞的培養(yǎng)特性進行了分析；此外，本研究采用MTT提取比色方法對支持細胞的體外增殖特性進行了分析比較；通過克隆擴增出牛DAZL基因并構建其真核表達載體pEGFP-N3-DAZL，采用脂質體介導使其轉染至睪丸支持細胞，利用Real-time PCR技術檢測支持細胞中過表達DAZL后精子發(fā)生相關基因的表達變化，并通過G418篩選穩(wěn)定過表達DAZL的細胞株。本研究為闡明支持細胞的體外培養(yǎng)特性及生物學應用前景奠定基礎，主要研究結果如下：（1）利用組合酶法可以對犢牛睪丸支持細胞進行... 

【文章來源】：東北農(nóng)業(yè)大學黑龍江省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

睪丸組織結構

逐漸形成精子尾部，線粒體成為精子尾部中段的線粒體鞘膜，細胞質則大部分脫落，僅由極少量的細胞質被保留在精子中。圖1-2 精子發(fā)生示意圖Fig. 1-2 Spermatogenesis schematic models1.2.3 支持細胞對精子發(fā)生的影響1.2.3.1 支持細胞的發(fā)育和成熟支持細胞也需要經(jīng)歷發(fā)育成熟的過程。處于青春期前的動物支持細胞屬于未成熟型，未成熟型的支持細胞有三種類型，Sf、Sa 和 Sb 型。處于胚胎型的支持細胞我們將之稱為 Sf 型，并于出生后 2w 轉化為 Sa 型。在 1 歲左右，Sa 型進一步轉化為 Sb 型。當機體發(fā)育至青春期，Sb 型支持細胞又轉化為成熟型（Sc）。研究表明，Sf、Sa 和 Sb 型支持細胞的吞噬能力都很強而且能夠抑制精原細胞的減數(shù)分裂。動物經(jīng)過青春期，支持細胞經(jīng)過一系列形態(tài)結構變化至 Sc 型

[26]。圖1-3 牛睪丸組織切片F(xiàn)ig. 1-3 Histological section through testicular parenchyma of a bull1：管腔；2：精細胞；3：精母細胞；4：精原細胞；5：支持細胞；6：成肌纖維細胞；7：間質細胞；8：微血管1: Lumen of Tubulus seminiferus contortus; 2: Spermatids; 3: Spermatocytes; 4: Spermatogonia; 5:Sertoli cell; 6: Myofibroblasts; 7: Leydig cells; 8: capillaries支持細胞分泌的抑制素（Inhibin）可以從支持細胞頂部進入曲細精管管腔，然后匯入睪丸網(wǎng)并吸收入血；也可從基底部進入間質后吸收入血。但成熟睪丸中 96%的抑制素是分泌入管腔的，可能與成熟睪丸的 BTB 日趨完善有關。臨床上利用 Inhibin 抑制生育，但不影響生6

【參考文獻】：
期刊論文
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[10]牛精子發(fā)生相關新基因b-DAZL的克隆、生物信息學分析與組織表達研究[J]. 張慶波,李齊發(fā),李家璜,李新福,劉振山,潘增祥,宋大偉,謝莊.  自然科學進展. 2008(05)

博士論文
[1]Desert Hedgehog誘導大鼠胚胎中腦神經(jīng)前體細胞定向分化的研究[D]. 楊彩俠.河北醫(yī)科大學 2009



本文編號：3595565