金黃色葡萄球菌是一種主要定植在人和動物皮膚表面、鼻咽部的革蘭氏陽性胞外菌,感染后會引起人和動物的多種疾病,如膿皮癥,敗血癥,乳房炎,關(guān)節(jié)炎等,嚴(yán)重威脅公共衛(wèi)生安全。TSST-1是金黃色葡萄球菌的一種重要的毒力因子,屬于超抗原毒素家族,在金黃色葡萄球菌致病機制中發(fā)揮著重要的作用。TSST-1具有A、B兩個結(jié)構(gòu)域,同其他超抗原毒素一樣,可以直接通過抗原遞呈細(xì)胞上的MHC II類分子,與Toll樣受體分子的Vβ區(qū)結(jié)合,從而激活T細(xì)胞,引起大量炎性細(xì)胞增殖和炎性因子的產(chǎn)生。已有研究表明,金黃色葡萄球菌可以通過激活天然免疫模式受體中的Toll樣受體和NOD樣受體促進(jìn)前炎細(xì)胞因子、抗炎細(xì)胞因子以及趨化因子的產(chǎn)生進(jìn)而引發(fā)機體炎癥反應(yīng),但是目前暫無關(guān)于TSST-1與宿主細(xì)胞炎癥反應(yīng)相關(guān)的研究。本試驗在對重慶部分地區(qū)山羊鼻腔中分離到的金黃色葡萄球菌進(jìn)行基因分型發(fā)現(xiàn),tst1基因攜帶率較高。基于此我們原核表達(dá)純化了重組TSST-1毒素,用TSST-1刺激小鼠腹腔巨噬細(xì)胞后,利用熒光定量RT-PCR,ELISA和Western Blot等技術(shù),研究TSST-1誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)及其相關(guān)機制,試驗結(jié)果如下:... 

【文章來源】：西南大學(xué)重慶市 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

金葡菌超抗原毒素SEA、SEB、TSS-1三維結(jié)構(gòu)示意圖

西南大學(xué)碩士學(xué)位論文6分鐘，而SAgs即使在100℃條件下煮30分鐘，仍然能保持它的免疫活性和生物活性，完全失去活性也是需要在218-248℃下至少煮30分鐘[51]。SAgs的作用機制最早由BernhardFleischer和HubertSchrezenmeier于1988年提出。據(jù)悉，SAgs可以不經(jīng)過抗原提呈細(xì)胞（Antigenpresentingcells，APC）的處理，直接以完整蛋白形式與APC膜上主要組織相容性復(fù)合體II類分子（MHCII）結(jié)合，通過MHCII分子與T細(xì)胞表面受體Vβ區(qū)直接交聯(lián)[52]（圖1.2）。大量研究表明，SAgs在極低濃度（1~10ng/mL）下即可刺激機體產(chǎn)生強烈的初次免疫應(yīng)答反應(yīng)，激活大量T淋巴細(xì)胞（是普通抗原的103~105倍）[53]。T細(xì)胞產(chǎn)生大量的前炎細(xì)胞因子（IL-2、IFN-γ和TNFα），從而導(dǎo)致一系列癥狀的表現(xiàn)，如高熱、皮疹、脫皮、嘔吐、腹瀉、低血壓，并經(jīng)常會導(dǎo)致多器官功能衰竭[54]。在細(xì)胞因子風(fēng)暴結(jié)束后，T細(xì)胞不再受到持續(xù)刺激，增殖停止，IL-2分泌減少，細(xì)胞逐漸死亡。這也表明了SAgs是一種強效免疫原，可誘導(dǎo)和中和抗體反應(yīng)[55]。圖1.2正�？乖˙）與超抗原（C）與TCR，CD28，APC和MHCII結(jié)合示意圖Fig.1.2Diagramofnormalantigen(B)andsuperantigen(C)bindtoTCR,CD28andmajorMHCIIofAPC1.2.3金葡菌超抗原毒素TSST-1研究進(jìn)展在金黃色葡萄球菌與宿主相互對抗多年中，金葡菌毒力基因和某些疾病癥狀之間已經(jīng)建立了很強的相關(guān)性。眾所周知的中毒性休克綜合癥（toxicshocksyndrome，TSS）就與金葡菌的一種超抗原毒素，TSST-1，密切相關(guān)。TSS是一種起病急驟、進(jìn)展迅速的嚴(yán)重感染性疾病，以發(fā)熱、皮疹、病后脫皮和脫屑、低血壓三個以上器官功能受損為特征，并伴有較高死亡率。1978年，Todd首次報道了由

第3章重慶地區(qū)山羊源性金黃色葡萄球菌流行及耐藥情況193.3試驗結(jié)果3.3.1山羊源性金黃色葡萄球菌分離情況本次調(diào)查從重慶市大足、永川、石柱三個地區(qū)的養(yǎng)殖場中分別采集了87、60、20份山羊鼻拭子。在共計167個山羊鼻拭子樣本中分離出45株金黃色葡萄球菌，總分離率為26.9%（45/167）。大足地區(qū)的金葡菌分離率最高，為29.8%（26/87），其次是永川25%（15/60）和石柱20%（4/20）。圖3-1金黃色葡萄球菌PCR鑒定圖。M:marker；1:ATCC25923；2-24:臨床分離菌株Fig.3-1DetectionofS.aureusspecificfemBgene.M:marker;1:ATCC25923;2-24:isolates.3.3.2分離株藥物敏感性試驗結(jié)果45株金黃色葡萄球菌藥物敏感性試驗結(jié)果見表3-4。45株金黃色葡萄球菌對苯唑西林、慶大霉素、萬古霉素、氯霉素、利福平和呋喃妥因完全敏感。對青霉素的耐藥率最高，達(dá)71.11%，其次是復(fù)方新諾明，31.11%。根據(jù)耐藥譜結(jié)果顯示，有一株菌對青霉素、紅霉素、四環(huán)素、環(huán)丙沙星、復(fù)方新諾明和克林霉素呈現(xiàn)出多重耐藥（見圖3-4），該多重耐藥菌株來源于永川。表3-4金黃色葡萄球菌分離株的藥敏試驗結(jié)果Table3-4ResultsofdrugsensitivitytestforS.aureus(n=45)抗生素名稱及縮寫菌株數(shù)量耐藥率或敏感率耐藥中敏敏感耐藥率（%）敏感率（%）青霉素（PEN）3201371.1128.89苯唑西林（OXS）00450100紅霉素（ERY）17372.2282.22慶大霉素（GEN）00450100萬古霉素（VAN）00450100四環(huán)素（TET）21424.4493.33氯霉素（CHL）00450100環(huán)丙沙（CIP）10442.2297.78復(fù)方新諾明（SXT）1452631.1157.78531bp

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本文編號：3593959