環(huán)狀RNA（circRNA）是一類內(nèi)源性非編碼RNA,具有ceRNA（競(jìng)爭(zhēng)性內(nèi)源RNA）功能。本課題組前期研究表明miR-26a促進(jìn)奶山羊子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞（EEC）增殖,但其具體的分子調(diào)控機(jī)制尚不清楚。本研究根據(jù)實(shí)驗(yàn)室前期構(gòu)建的circRNA文庫(kù)發(fā)現(xiàn)circRNA3669在奶山羊容受前期子宮內(nèi)膜組織中特異性表達(dá),且生物信息學(xué)預(yù)測(cè)發(fā)現(xiàn),circRNA3669可作為ceRNA與miR-26a結(jié)合。因此,本研究推測(cè)circRNA3669可作為ceRNA通過(guò)miR-26a調(diào)控相關(guān)靶基因的表達(dá),進(jìn)而調(diào)控EEC增殖和凋亡。本試驗(yàn)以EEC為研究對(duì)象,通過(guò)干擾和過(guò)表達(dá)策略,利用stem-loop RT-qPCR、RT-qPCR、雙熒光素酶活性檢測(cè)系統(tǒng)、免疫組化、Western blot、CCK-8、EdU、細(xì)胞凋亡等檢測(cè)技術(shù),研究EEC中circRNA3669、miR-26a和RCN2之間的調(diào)控關(guān)系,以及circRNA3669和RCN2對(duì)EEC的調(diào)控作用,及其對(duì)MAPK信號(hào)通路和BCL2、BAX、Caspase3等相關(guān)凋亡蛋白的影響。主要研究結(jié)果如下:1.circRNA3669可作為ceRNA吸附mi... 

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circRNA的生物發(fā)生機(jī)制Figure1-1biogeneticmechanismofcircRNAcircRNA生物發(fā)生的調(diào)控規(guī)則是相互依賴的，順式調(diào)控元件和反式作用因子控制circRNA的剪接過(guò)程(Ling-LingandLi,2015)

包括細(xì)胞因子、轉(zhuǎn)錄因子和受體，或一個(gè)基因可能是許多不同 miRNA 的靶基因(Axtell and Meyers, 2018)。迄今為止，有70到100個(gè)特定的靶基因被證實(shí)為幾個(gè)miRNA的靶點(diǎn)(Fan et al., 2019)。圖 1-3 miRNA 作用機(jī)制圖Figure 1-3 Schematic representation of microRNA mechanism of action1.4.2 miRNA 對(duì)細(xì)胞功能的調(diào)控作用一個(gè) miRNA 可以靶向調(diào)控多個(gè)靶基因(Lee et al., 2008; Stappert et al., 2015)，多個(gè)miRNA 也能靶向調(diào)控同一個(gè)靶基因(Achache and Revel, 2006)。一些 miRNA 通過(guò)抑制靶基因的表達(dá)，產(chǎn)生對(duì)細(xì)胞功能較大的調(diào)控作用(Coppola et al., 2010)。因此，miRNA 可能與轉(zhuǎn)錄因子一樣在調(diào)控動(dòng)物細(xì)胞功能的過(guò)程中發(fā)揮著潛在的作用(Hobert, 2008)。研究表明 miR-205 可以通過(guò)識(shí)別血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）的 3′UTR 區(qū)域，直接影響 VEGF 的表達(dá)(Jude et al., 2012)。包括子宮內(nèi)膜在內(nèi)的許多組織血管的正常發(fā)育需要維持 VEGF 表達(dá)水平的平衡(Cakmak et al., 2017)。越來(lái)越多的證據(jù)表明，不同類型細(xì)胞釋放的外泌體或微小囊泡中含有 miRNA，這為細(xì)胞間的通訊提供了一種替代模式(Chi et al., 2009)。例如 miR-125b 在豬的子宮中高

第二章 circRNA3669 通過(guò)吸附 miR-26a 抑制奶山羊子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞凋亡2.3 結(jié)果與分析2.3.1 circRNA3669 在奶山羊子宮內(nèi)膜容受期與容受前期的差異性表達(dá)本研究根據(jù)實(shí)驗(yàn)室前期構(gòu)建的參與奶山羊子宮內(nèi)膜容受期形成的 circRNA 文庫(kù)，使用生物信息學(xué)預(yù)測(cè)，并篩選出與 miR-26a 有靶向調(diào)控作用，且表達(dá)量高、差異倍數(shù)大的關(guān)鍵 circRNA3669。為驗(yàn)證 circRNA3669 在奶山羊子宮內(nèi)膜容受期與容受前期的差異性表達(dá)，通過(guò) RT-qPCR 檢測(cè) circRNA3669 在奶山羊子宮內(nèi)膜容受期與容受前期的表達(dá)量。檢測(cè)結(jié)果顯示在奶山羊子宮內(nèi)膜容受期與容受前期相比 circRNA3669 的表達(dá)量極顯著下調(diào)（P<0.01，圖 2-1）。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3592625