豬流感是一種由豬流感病毒（Swine influenza virus,SIV）引起的豬的急性呼吸道疾病,其主要臨床特征是發(fā)熱、嗜睡、厭食癥和鼻塞,給養(yǎng)豬業(yè)帶來了巨大的經(jīng)濟損失。豬流感病毒主要包括H1N1,H1N2和H3N2三個亞型。豬一旦感染,會迅速發(fā)病,且常與其他呼吸道病原體混合感染。目前,豬流感血清學診斷方法主要包括血凝抑制試驗和ELISA,雖然血凝抑制試驗是豬流感血清學診斷的標準方法,但該方法結果的判定存在主觀性,而且不適宜大規(guī)模樣品的檢測。傳統(tǒng)ELISA方法主要是基于多克隆抗體和單克隆抗體而建立的,但單克隆抗體的制備費時費力,且生產(chǎn)成本高,多克隆抗體存在特異性低的問題。納米抗體具有分子量小、穩(wěn)定性好、高親和力、高特異性和易于基因工程改造等優(yōu)勢,并且可通過不同的表達系統(tǒng)獲得,是一種良好的診斷和治療工具。本研究應用原核表達系統(tǒng)表達SIV高度保守的核衣殼蛋白（Nucleocapsid protein,NP）,并通過噬菌體展示技術篩選NP蛋白特異性納米抗體,納米抗體與生物素受體肽融合表達和純化后,通過生物素受體肽與生物素的結合標記生物素,用生物素化的納米抗體作為阻斷抗體,建立了一種特異... 

【文章來源】：西北農(nóng)林科技大學陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

甲型流感病毒（IAV）結構(Deemetal.2009)

2 常規(guī)抗體重鏈抗體及納米抗體的結構示意圖（引自(Cui et al. 20l Diagram of conventional Antibody, heavy chain Antibody and nanofrom (Cui et al. 2018))體的結構特征的序列的變異性主要集中在三個高變區(qū)，這些區(qū)域被regoin，F(xiàn)R）所包圍, 折疊的 V 域包含 9 個 β 鏈(A-B-C-C酸和 94 位半胱氨酸之間形成一個保守的二硫鍵連接，，在此體系結構中，HV 區(qū)域分別位于連接 B-C、C'-C"和構中，并且在結構域的 N 端形成一個連續(xù)的表面，它的名稱是互補決定區(qū)(Complementarity-determining regio，其他環(huán)狀結構的長度的變化是有限的。在人類或老鼠型環(huán)狀結構，連環(huán)結構組合的數(shù)量也十分有限。因此，環(huán)酸殘基的存在可預測到它的實際結構(Chothia et al. 1992)。區(qū)環(huán)狀結構和輕鏈可變區(qū)的三個環(huán)狀結構并置，總的來說

較長的 HV1 環(huán)狀結構是由于其起源于生殖細胞系基因組后與 VHH 結構域的功能選擇有關，變長的環(huán)狀結構相反的，因此需要二硫鍵來維持較長環(huán)狀結構的穩(wěn)定在 H1 和 H3 環(huán)狀結構中包含一對額外的 Cys 殘基，它沒有抗原的情況下，明顯限制了環(huán)的靈活性(Conrath et VHHs 中，H3 和 FR2 位置之間也存在二硫鍵。盡管 點 30、32 或 33(FR2 中的位置 50 或 H2 中的位置 55 H3 循環(huán)的 N 端、中部或 C 端的所有的可能位置，在具一種特殊的構象，稱為拉伸扭轉(zhuǎn)，使環(huán)的底部被扭曲 環(huán)中，屏蔽了 Phe42 與水的接觸，并且由 Trp118(FR47 形成的芳香核穩(wěn)定了 H3 環(huán)的構象，VHH 結構域的長的平行面，這使得它非常適合插入抗原表面的空腔中原決定簇實際的作用面(Jochen et al. 2012)。較長的 H3構，然而，這似乎是一種特例，大多數(shù) Nbs 結構中的成平坦的抗原決定簇接觸面。

【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
[1]豬繁殖與呼吸綜合征病毒Nsp9蛋白納米抗體的篩選及其抗病毒功能研究[D]. 劉紅亮.西北農(nóng)林科技大學 2016



本文編號：3589003