豬流感是一種由豬流感病毒（Swine influenza virus,SIV）引起的豬的急性呼吸道疾病,其主要臨床特征是發(fā)熱、嗜睡、厭食癥和鼻塞,給養(yǎng)豬業(yè)帶來(lái)了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。豬流感病毒主要包括H1N1,H1N2和H3N2三個(gè)亞型。豬一旦感染,會(huì)迅速發(fā)病,且常與其他呼吸道病原體混合感染。目前,豬流感血清學(xué)診斷方法主要包括血凝抑制試驗(yàn)和ELISA,雖然血凝抑制試驗(yàn)是豬流感血清學(xué)診斷的標(biāo)準(zhǔn)方法,但該方法結(jié)果的判定存在主觀性,而且不適宜大規(guī)模樣品的檢測(cè)。傳統(tǒng)ELISA方法主要是基于多克隆抗體和單克隆抗體而建立的,但單克隆抗體的制備費(fèi)時(shí)費(fèi)力,且生產(chǎn)成本高,多克隆抗體存在特異性低的問(wèn)題。納米抗體具有分子量小、穩(wěn)定性好、高親和力、高特異性和易于基因工程改造等優(yōu)勢(shì),并且可通過(guò)不同的表達(dá)系統(tǒng)獲得,是一種良好的診斷和治療工具。本研究應(yīng)用原核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)SIV高度保守的核衣殼蛋白（Nucleocapsid protein,NP）,并通過(guò)噬菌體展示技術(shù)篩選NP蛋白特異性納米抗體,納米抗體與生物素受體肽融合表達(dá)和純化后,通過(guò)生物素受體肽與生物素的結(jié)合標(biāo)記生物素,用生物素化的納米抗體作為阻斷抗體,建立了一種特異... 

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

甲型流感病毒（IAV）結(jié)構(gòu)(Deemetal.2009)

2 常規(guī)抗體重鏈抗體及納米抗體的結(jié)構(gòu)示意圖（引自(Cui et al. 20l Diagram of conventional Antibody, heavy chain Antibody and nanofrom (Cui et al. 2018))體的結(jié)構(gòu)特征的序列的變異性主要集中在三個(gè)高變區(qū)，這些區(qū)域被regoin，F(xiàn)R）所包圍, 折疊的 V 域包含 9 個(gè) β 鏈(A-B-C-C酸和 94 位半胱氨酸之間形成一個(gè)保守的二硫鍵連接，，在此體系結(jié)構(gòu)中，HV 區(qū)域分別位于連接 B-C、C'-C"和構(gòu)中，并且在結(jié)構(gòu)域的 N 端形成一個(gè)連續(xù)的表面，它的名稱是互補(bǔ)決定區(qū)(Complementarity-determining regio，其他環(huán)狀結(jié)構(gòu)的長(zhǎng)度的變化是有限的。在人類或老鼠型環(huán)狀結(jié)構(gòu)，連環(huán)結(jié)構(gòu)組合的數(shù)量也十分有限。因此，環(huán)酸殘基的存在可預(yù)測(cè)到它的實(shí)際結(jié)構(gòu)(Chothia et al. 1992)。區(qū)環(huán)狀結(jié)構(gòu)和輕鏈可變區(qū)的三個(gè)環(huán)狀結(jié)構(gòu)并置，總的來(lái)說(shuō)

較長(zhǎng)的 HV1 環(huán)狀結(jié)構(gòu)是由于其起源于生殖細(xì)胞系基因組后與 VHH 結(jié)構(gòu)域的功能選擇有關(guān)，變長(zhǎng)的環(huán)狀結(jié)構(gòu)相反的，因此需要二硫鍵來(lái)維持較長(zhǎng)環(huán)狀結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定在 H1 和 H3 環(huán)狀結(jié)構(gòu)中包含一對(duì)額外的 Cys 殘基，它沒(méi)有抗原的情況下，明顯限制了環(huán)的靈活性(Conrath et VHHs 中，H3 和 FR2 位置之間也存在二硫鍵。盡管 點(diǎn) 30、32 或 33(FR2 中的位置 50 或 H2 中的位置 55 H3 循環(huán)的 N 端、中部或 C 端的所有的可能位置，在具一種特殊的構(gòu)象，稱為拉伸扭轉(zhuǎn)，使環(huán)的底部被扭曲 環(huán)中，屏蔽了 Phe42 與水的接觸，并且由 Trp118(FR47 形成的芳香核穩(wěn)定了 H3 環(huán)的構(gòu)象，VHH 結(jié)構(gòu)域的長(zhǎng)的平行面，這使得它非常適合插入抗原表面的空腔中原決定簇實(shí)際的作用面(Jochen et al. 2012)。較長(zhǎng)的 H3構(gòu)，然而，這似乎是一種特例，大多數(shù) Nbs 結(jié)構(gòu)中的成平坦的抗原決定簇接觸面。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]駱駝來(lái)源的納米抗體人源化研究進(jìn)展[J]. 趙明軍,劉煜.  藥物生物技術(shù). 2018(03)
[2]包涵體蛋白復(fù)性的研究進(jìn)展[J]. 付明娟,林接玉,謝捷明.  醫(yī)學(xué)綜述. 2015(20)
[3]豬流感病毒檢測(cè)技術(shù)研究進(jìn)展[J]. 文英會(huì),劉占通,辛婷.  鄭州牧業(yè)工程高等�？茖W(xué)校學(xué)報(bào). 2011(02)
[4]A型豬流感病毒實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)方法的建立及應(yīng)用[J]. 歐陽(yáng)振宇,唐連飛,朱中武,肖家勇,孟芳,黃萍,吳愈柏.  中國(guó)畜牧獸醫(yī). 2010(09)
[5]分子生物學(xué)技術(shù)在豬流感診斷中的應(yīng)用[J]. 謝金文,苗立中,沈志強(qiáng).  吉林農(nóng)業(yè)科學(xué). 2010(03)
[6]分子伴侶與蛋白質(zhì)折疊[J]. 井明艷,孫建義.  科技通報(bào). 2004(05)
[7]生物素—鏈霉親和素系統(tǒng)在檢測(cè)MHV抗體中的應(yīng)用[J]. 屈霞琴,姜文琴,錢琴,應(yīng)賢平,潘振業(yè),陳天培.  上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué). 1996(Z1)

博士論文
[1]豬繁殖與呼吸綜合征病毒Nsp9蛋白納米抗體的篩選及其抗病毒功能研究[D]. 劉紅亮.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2016



本文編號(hào)：3589003