鴨坦布蘇病毒感染于2010年在我國首次爆發(fā),迅速席卷了整個養(yǎng)鴨密集地區(qū),給我國養(yǎng)鴨業(yè)造成了巨大損失,目前該病已成為我國主要鴨病之一。本研究從病毒的生物學特性、基因組測序與進化分析、實驗室診斷方法的建立以及感染性克隆的構建等四個方面對鴨坦布蘇病毒進行了相關研究。1、病毒分離鑒定與特性分析從全國各地發(fā)病的鴨群中分離到十多株鴨坦布蘇病毒,通過理化特性分析,發(fā)現(xiàn)該病毒不能凝集雞、鴨、鵝和鴿的紅細胞,對氯仿和去氧膽酸鈉敏感,對酸敏感,不耐熱,MgCL2起不到保護作用。通過電鏡觀察,我們發(fā)現(xiàn)該病毒為圓形或橢圓形粒子,大小約為50nm。該病毒可通過雞胚或鴨胚進行分離,胚體在72h～120h內(nèi)死亡,胚體水腫,胚肝出血、壞死明顯。該病毒在DEF、Vero、DF-1、BHK-21等細胞上生長良好、病變明顯。不同毒株對CEF的適應性存在較大差異,有的毒株盲傳3代就可適應CEF,而有的毒株盲傳6代仍不適應。動物回歸試驗顯示,通過腦內(nèi)、頸部皮下和點眼滴鼻口服三種途徑均能復制出該病典型的癥狀和病變,但這三種途徑發(fā)病快慢有所差別,腦內(nèi)接種最快,點眼滴鼻口服最慢。2、基因組測序與進化分析我們通過隨機引物以及參考其他黃... 

【文章來源】：揚州大學江蘇省

【文章頁數(shù)】：109 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
符號說明
氨基酸的簡寫符號
綜述一 鴨坦布蘇病毒感染研究進展
    參考文獻
綜述二 黃病毒基因組結構與功能的研究進展
    參考文獻
綜述三 正鏈RNA病毒反向遺傳操作技術研究進展
    參考文獻
第一章 鴨坦布蘇病毒的分離鑒定及特性分析
    1 材料與方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2 結果與分析
        2.1 病毒分離
        2.2 病毒特性分析
    3 討論
        3.1 病毒的分離鑒定
        3.2 病毒特性分析
    參考文獻
第二章 鴨坦布蘇病毒的基因組測序和進化分析
    1 材料與方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2 結果與分析
        2.1 隨機引物擴增BZ-10株
        2.2 BZ-10株基因組測序
        2.3 其他5株病毒基因組測序
        2.4 鴨坦布蘇病毒基因組特征
        2.5 鴨坦布蘇病毒進化地位分析
        2.6 鴨坦布蘇病毒E蛋白結構與進化分析
        2.7 不同鴨坦布蘇病毒株的血清交叉中和試驗
    3 討論
    參考文獻
第三章 鴨坦布蘇病毒實驗室診斷方法的建立
    1 材料與方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2 結果與分析
        2.1 RT-PCR檢測方法
        2.2 熒光定量PCR檢測方法
        2.3 間接ELISA檢測方法的建立
    3 討論
    參考文獻
第四章 鴨坦布蘇病毒感染性克隆的構建
    1 材料與方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2 結果與分析
        2.1 基因片段擴增
        2.2 全長cDNA克隆的構建
        2.3 RNA體外轉染DF-1細胞
        2.4 RT-PCR方法鑒定
        2.5 間接免疫熒光試驗鑒定
        2.6 酶切鑒定
        2.7 子代病毒的接種雞胚
        2.8 子代病毒在DF-1上的TCID_(50)
    3 討論
    參考文獻
全文總結
附錄
    附錄1：實驗用6株鴨坦布蘇病毒的多聚蛋白氨基酸序列比對
    附錄2：DNA Marker的分子量
致謝
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【參考文獻】：
期刊論文
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[2]鴨坦布蘇病毒E基因的克隆表達及初步應用[J]. 楊少艷,于可響,王華,史玉穎,馬秀麗,李建亮,崔言順.  浙江農(nóng)業(yè)學報. 2012(05)
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本文編號：3581174