本文主要進行了奶牛乳腺上皮細胞（BMEC）三維培養(yǎng)體系的建立，在此基礎(chǔ)上通過不同的試驗條件下（全營養(yǎng)因素處理、單一氨基酸處理、催乳素處理）比較二、三維養(yǎng)模式對奶牛乳腺上皮細胞泌乳代謝相關(guān)基因的影響。同時利用優(yōu)化的培養(yǎng)模式進行支鏈氨基酸和催乳素影響乳蛋白基因轉(zhuǎn)錄的的研究。通過以上研究，為BMEC三維培養(yǎng)體系的建立和支鏈氨基酸、催乳素調(diào)控BMEC乳蛋白基因轉(zhuǎn)錄提供一定的理論基礎(chǔ)。試驗結(jié)果如下：1、BMEC在Matrigel基質(zhì)膠中可以快速的形成類腺泡結(jié)構(gòu)，而在鼠尾膠中則形成散落的聚集物。且在培養(yǎng)的過程中Matrigel基質(zhì)膠比鼠尾膠穩(wěn)定。三維模式下培養(yǎng)時間和接種密度影響B(tài)MEC中αs1-酪蛋白、β-酪蛋白、κ-酪蛋白的基因表達量。三維模式下BMEC在培養(yǎng)的第5d形成了完全成熟的腺泡，三維模式下BMEC的適合接種密度為1x106個/mL。2、在相同的營養(yǎng)物質(zhì)及激素水平下，三維培養(yǎng)的BMEC三種乳蛋白的基因表達量顯著高于二維培養(yǎng)（P＜0.05），三維培養(yǎng)的BMEC通過western blot的方法能夠檢測到β-酪蛋白，二維培養(yǎng)的BMEC檢測不到β-酪蛋白。三維培養(yǎng)的BMEC在形態(tài)上呈現(xiàn)的特點與... 

【文章來源】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學內(nèi)蒙古自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：112 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

二維和三維接種方式模式圖

圖 1 二維和三維接種方式模式圖Fig.1 Schematic of inoculation method for 3D and 2D culture奶牛乳腺在體內(nèi)的發(fā)育及體外三維培養(yǎng)條件奶牛乳腺上皮細胞的發(fā)育 奶牛乳腺在體內(nèi)的發(fā)育奶牛的乳腺在胚胎期開始發(fā)育，經(jīng)歷青春期、妊娠期、泌乳期和干奶奶牛乳腺的典型特征是形成一個強大的樹枝狀的管腔網(wǎng)。妊娠期在激皮細胞開始大量的增殖，形成一個末端有腺泡的管腔網(wǎng)絡，這個網(wǎng)絡奶牛乳腺泌乳的基本分泌單元，結(jié)構(gòu)見圖 1。乳腺的發(fā)育在分娩前已經(jīng)量乳汁的分泌主要是由這些具有分泌活性的乳腺上皮細胞完成。到上皮細胞開始凋亡，隨之奶牛乳汁的分泌結(jié)束[93]。在奶牛的乳腺中乳增殖、分化和消退的過程，隨著奶牛不同的生理期而循環(huán)往復，進而。

二、三維培養(yǎng)模式對奶牛乳腺上皮細胞泌乳代謝相關(guān)基因的影響4.2 體外三維培養(yǎng)條件奶牛乳腺上皮細胞的發(fā)育在三維培養(yǎng)模式下 BMEC 的發(fā)育過程與體內(nèi)乳腺的發(fā)育過程相似，間也會形成特定的結(jié)構(gòu)。BMEC 在基質(zhì)膠中經(jīng)歷連續(xù)的增殖和遷移聚個發(fā)育完全的類腺泡結(jié)構(gòu)。BMEC 在三維培養(yǎng)模式下，也經(jīng)歷細胞腺構(gòu)的形成、腺泡結(jié)構(gòu)的凋亡。BMEC 在基質(zhì)膠中的發(fā)育過程見圖 8。5 三維培養(yǎng)模式下凝膠誘導細胞分化的原理以凝膠為載體的三維培養(yǎng)，對細胞分化起維持和調(diào)控作用的主要是凝蛋白和培養(yǎng)體系內(nèi)的激素。


本文編號：3576547