巴貝斯蟲�。˙abesiosis）是由巴貝斯科、巴貝斯屬的多種巴貝斯蟲寄生于脊椎動物紅細(xì)胞所引起的一類疾病的總稱，以高熱、貧血、黃疸和血紅蛋白尿?yàn)榕R床特征，�？蓪�(dǎo)致發(fā)病動物死亡，嚴(yán)重威脅著畜牧業(yè)的發(fā)展和人類健康。牛巴貝斯蟲病是由牛的巴貝斯蟲（Babesia spp）所引起的一類血液原蟲病，其中牛巴貝斯蟲（Babesia bovis）和雙芽巴貝斯蟲（Babesia bigemina）是分布最廣、危害最為嚴(yán)重的兩種病原，由于二者均以微小牛蜱（Boophilus microplus）為傳播媒介，常呈混合感染，臨床上較難區(qū)分，給該類疾病的診斷帶來較大的困難。因此，開展該病的鑒別診斷研究具有重要的意義。本研究通過對雙芽巴貝斯蟲和牛巴貝斯蟲的棒狀體相關(guān)蛋白1（Rhoptry-associated Protein-1，RAP-1）基因的羧基端進(jìn)行克隆、表達(dá)，在對重組蛋白反應(yīng)原性及特異性進(jìn)行分析的基礎(chǔ)上，初步建立了針對雙芽巴貝斯蟲感染的間接ELISA診斷方法，利用田間血清樣品對本法進(jìn)行了評價。本文的主要研究內(nèi)容如下：1.雙芽巴貝斯蟲和牛巴貝斯蟲RAP-1C基因的序列分析、克隆與表達(dá)利用生物信息學(xué)軟件對... 

【文章來源】：石河子大學(xué)新疆維吾爾自治區(qū) 211工程院校

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

蟲體入侵機(jī)體過程中宿主的免疫反應(yīng)A：蟲體入侵初期；B：蟲體持續(xù)上升期；C：蟲體消退期Fig.1TheimmunoreactionofhostinthecourseofinvadingbytheBabesia.

巴貝斯蟲與弓形蟲、隱孢子蟲、瘧原蟲、艾美爾球蟲等同屬頂復(fù)門，它們在亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)上非常相似，均含有―頂端復(fù)合器‖（Apical complex）結(jié)構(gòu)。頂端復(fù)合器是包括頂泡、類錐體、極環(huán)、棒狀體及微線等在內(nèi)的細(xì)胞器組合，這一結(jié)構(gòu)不僅形成其分類上的結(jié)構(gòu)依據(jù)，而且使頂復(fù)門寄生蟲具有相對保守的宿主細(xì)胞入侵機(jī)制[29]。微線、棒狀體和致密顆粒是頂復(fù)門原蟲特有的亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，這些亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)時序性地分泌組成、結(jié)構(gòu)和功能各異的蛋白分子，其中有些蛋白質(zhì)分子介導(dǎo)蟲體對宿主細(xì)胞的識別和黏附，有些介導(dǎo)蟲體的運(yùn)動，有些參與蟲體與宿主細(xì)胞相互作用中的分子運(yùn)輸功能，還有一些則形成納蟲空泡或改變宿主細(xì)胞的生理功能其中，棒狀體是頂復(fù)門原蟲所特有的亞細(xì)胞器[30,31]，由電子致密的嗜鋨酸物質(zhì)構(gòu)成，位于頂復(fù)門原蟲的頂端，其頸部較細(xì)，可深入類錐體內(nèi)，后部膨大成棒狀，位于細(xì)胞質(zhì)中。同時，棒狀體也是頂復(fù)門寄生蟲共有的器官，參與宿主細(xì)胞入侵的核心作用。棒狀體蛋白家族成員最重要的作用是在蟲體入侵過程中，介導(dǎo)納蟲泡膜的形成，將蟲體包裹在納蟲泡內(nèi)部，從而使蟲體免受宿主免疫系統(tǒng)的侵害[32]。棒狀體結(jié)構(gòu)模式圖和電鏡圖分別見圖 2 和圖 3：

圖 3 棒狀體電鏡圖Fig.3 Electron microscopy figure of Rhoptry子孢子入侵紅細(xì)胞的過程是通過一些蟲體表面配體和互作用實(shí)現(xiàn)的[33]。頂復(fù)門原蟲與入侵相關(guān)的蛋白分子很主要包括：頂膜抗原、GPI 錨定裂殖子表面抗原、凝血蛋白、相關(guān)黏附蛋白和多變紅細(xì)胞表面抗原等。有關(guān)這相互作用研究不再一一贅述，僅將本文涉及到的optry-associated Protein-1，RAP-1）做詳細(xì)介紹。RAP-1 是棒狀體分泌的一種與入侵相關(guān)的蛋白質(zhì)分子，是瘧原蟲屬棒狀體釋放出來的多種蛋白分子中的一-2、RAP-3 等多種蛋白分子[34]。隨著研究的不斷深入，、雙芽巴貝斯蟲和環(huán)形泰勒蟲被報道[35]。RAP-1 位于裂殖子頂端，隨后發(fā)現(xiàn)在子孢子、裂殖子階異性抗體能夠抑制子孢子粘附宿主細(xì)胞[39]。不同種巴 RAP-1 之間具有保守性，但均能介導(dǎo)中和相應(yīng)巴貝斯

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]用重組的牛巴貝斯蟲棒狀體蛋白1作為ELISA診斷抗原進(jìn)行牛群中牛巴貝斯蟲病的血清流行病學(xué)調(diào)查[J]. 王慧英,馬利青,陸艷,蔡其剛,王戈平,葉成玉.  中國奶牛. 2011(22)
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[3]我國牛蜱傳性血液原蟲的蟲種調(diào)查和分布特征的研究[J]. 呂文祥,呂文順,張其才,羅建勛,殷宏,竇惠芳.  中國獸醫(yī)科技. 1995(08)
[4]牛血孢子蟲單一種的分離技術(shù)及其保藏方法的研究——牛巴貝斯蟲和卵形巴貝斯蟲在其媒介蜱血淋巴中的裂殖子觀察[J]. 白啟,劉光遠(yuǎn),周俊英,張林.  中國獸醫(yī)科技. 1991(06)
[5]牛血孢子蟲單一種的分離技術(shù)及其保藏方法的研究——牛巴貝斯蟲純種蟲株的分離[J]. 白啟,劉光遠(yuǎn),周俊英,張林.  中國獸醫(yī)科技. 1991(01)
[6]ELISA陽性反應(yīng)閾值的確定方法探討[J]. 朱冠,鄭志國,詹麗君,陳彩華,傅翠娥,楊紀(jì)順.  中國公共衛(wèi)生學(xué)報. 1990(04)
[7]微小牛蜱對牛巴貝西蟲和雙芽巴貝西蟲傳播能力的研究[J]. 呂文順,殷宏,余豐,呂文祥,張其才,竇惠芳.  中國獸醫(yī)科技. 1989(07)

博士論文
[1]巴貝斯蟲未定種的發(fā)現(xiàn)及牛巴貝斯蟲病的免疫診斷和藥物防治研究[D]. 羅建勛.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2004

碩士論文
[1]牛巴貝斯蟲病ELISA檢測方法的建立[D]. 李安巖.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2013
[2]牛巴貝斯蟲體外培養(yǎng)體系及ELISA檢測方法的建立[D]. 杜鵬飛.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2012



本文編號：3575222