雞毒支原體（Mycoplasma gallisepticum, MG）能夠引起雞的慢性呼吸道疾�。–hronic respiratory disease, CRD）,該病分布廣泛,給世界各地養(yǎng)雞業(yè)帶來(lái)巨大的經(jīng)濟(jì)損失。研究表明,MG主要通過(guò)表面的黏附蛋白pMGA （Protein Mycoplasma Gallisepticum AdheA-In）與機(jī)體的受體結(jié)合而產(chǎn)生致病作用。課題組前期研究發(fā)現(xiàn)載脂蛋白ApoA-I是pMGA1.2的相互作用蛋白。本研究主要對(duì)pMGA1.2與ApoA-I相互作用的的功能結(jié)構(gòu)域進(jìn)行了研究,為進(jìn)一步研究pMGA1.2與ApoA-I相互作用的的功能位點(diǎn)奠定了基礎(chǔ),主要研究成果如下：1.生物信息學(xué)預(yù)測(cè)pMGA1.2共有4個(gè)功能結(jié)構(gòu)域,分別位于25-77位、105-166位氨基酸之間的兩個(gè)FIVAR （Uncharacterised Sugar-binding Domain）結(jié)構(gòu)域；位于171-596位氨基酸之間的Myco-haema （Mycoplasma haemagglutinin Domain）結(jié)構(gòu)域,位于491-595位氨基酸之間的Galactose-b... 

【文章來(lái)源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
目錄
摘要
ABSTRACT
縮略詞表
1 文獻(xiàn)綜述
    1.1 雞毒支原體的危害和防治
        1.1.1 雞毒支原體的危害
        1.1.2 雞毒支原體的防治
    1.2 pMGA1.2研究進(jìn)展
    1.3 ApoA-I研究進(jìn)展
    1.4 蛋白結(jié)構(gòu)域
    1.5 研究的目的及意義
2 材料和方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)樣本
        2.1.2 主要儀器
        2.1.3 主要試劑及耗材
        2.1.4 主要溶液的配制
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 生物信息學(xué)預(yù)測(cè)pMGA1.2的功能結(jié)構(gòu)域
        2.2.2 pMGA1.2片段(1,2,3,4)的克隆
        2.2.3 pMGA1.2-N(N=1,2)原核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建
        2.2.4 KG-pMGA1.2-N(N=1,2)的誘導(dǎo)表達(dá)
        2.2.5 pMGA1.2-N(N=1,2)蛋白純化
        2.2.6 表達(dá)產(chǎn)物的Western-blot檢測(cè)
        2.2.7 病毒鋪覆蛋白印跡(VOPBA)分析
        2.2.8 PG、PR、PG-AI、PR-AI菌液復(fù)蘇
        2.2.9 PG、PR、PG-AI、PR-AI酶切分析
        2.2.10 pCDNA3.1-GFP/RFP-pMGA1.2-N(N=3,4)真核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建
        2.2.11 去內(nèi)毒素質(zhì)粒的制備
        2.2.12 細(xì)胞培養(yǎng)及質(zhì)粒轉(zhuǎn)染
        2.2.13 轉(zhuǎn)染后細(xì)胞狀態(tài)和融合蛋白的觀察
        2.2.14 流式細(xì)胞儀檢測(cè)蛋白表達(dá)量
3 結(jié)果與分析
    3.1 生物信息學(xué)預(yù)測(cè)pMGA1.2的功能結(jié)構(gòu)域
    3.2 pMGA1.2-N(N=1,2,3,4)的克隆
        3.2.1 pMGA1.2-N(N=1,2,3,4)的擴(kuò)增
        3.2.2 T-pMGA1.2-N(N=1,2,3,4)重組質(zhì)粒的鑒定
    3.3 原核表達(dá)質(zhì)粒KG-pMGA1.2-N(N=1,2)的構(gòu)建
        3.3.1 原核表達(dá)質(zhì)粒KG-pMGA1.2-N(N=1,2)的鑒定
    3.4 pMGA1.2-N(N=1,2)蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)和純化
        3.4.1 pMGA1.2-N(N=1,2)蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)
        3.4.2 pMGA1.2-N(N=1,2)蛋白的純化
    3.5 pMGA1.2-N(N=1,2)蛋白的免疫原性分析
        3.5.1 pMGA1.2-1蛋白的Western bolt檢測(cè)
        3.5.2 pMGA1.2-2蛋白的Western bolt檢測(cè)
    3.6 病毒鋪覆蛋白印跡
        3.6.1 pMGA1.2-1的病毒鋪覆蛋白印跡
        3.6.2 pMGA1.2-2的病毒鋪覆蛋白印跡
    3.7 真核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建
        3.7.1 真核表達(dá)質(zhì)粒PG,PR,PG-AI,PR-AI的鑒定
        3.7.2 真核表達(dá)質(zhì)粒PG-3,PR-3的鑒定
        3.7.3 真核表達(dá)質(zhì)粒PG-4,PR-4的鑒定
    3.8 真核表達(dá)質(zhì)粒在Hela細(xì)胞中的表達(dá)
    3.9 流式細(xì)胞儀檢測(cè)ApoA-I與pMGA1.2蛋白的表達(dá)量
4 討論
    4.1 生物信息學(xué)預(yù)測(cè)功能結(jié)構(gòu)域
    4.2 pMGA1.2-N(N=1,2,3,4)的克隆
    4.3 pMGA1.2-N(N=1,2)原核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建
    4.4 pMGA1.2-N(N=1,2)蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)和純化
    4.5 pMGA1.2-N(N=1,2)蛋白的免疫原性分析
    4.6 pMGA1.2-N(N=1,2)蛋白的病毒鋪覆蛋白印跡
    4.7 真核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建
    4.8 流式細(xì)胞儀檢測(cè)ApoA-I與pMGA1.2蛋白的表達(dá)量
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]雞毒霉形體黏附蛋白與雞胚不同組織黏附特異性的研究[J]. 彭秀麗,高俊偉,胡思順,胡福利,畢丁仁.  農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào). 2008(05)
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[3]雞毒支原體的分離鑒定及AA肉種雞場(chǎng)慢性呼吸道病的流行狀況分析[J]. 孫晴,尹遜河,李同樹(shù),衣婷婷,李太祥.  山東農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2007(03)
[4]外源蛋白在大腸桿菌中的可溶性表達(dá)策略[J]. 朱紅裕,李強(qiáng).  過(guò)程工程學(xué)報(bào). 2006(01)
[5]雞毒霉形體HS株pMGA多基因族序列分析[J]. 沈青春,畢丁仁,翁長(zhǎng)江,李自力,石德時(shí),許青榮,程峰.  中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2003(03)
[6]雞毒霉形體HS株pMGA多基因族的研究[J]. 翁長(zhǎng)江,畢丁仁,沈青春,李自力,石德時(shí),許青榮,劉梅,程峰.  中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2003(02)
[7]控制雞霉形體病的新思路[J]. 傅先強(qiáng).  中國(guó)家禽. 2000(08)
[8]雞毒支原體HS株病原性研究[J]. 畢丁仁,許清榮,王桂枝.  中國(guó)畜禽傳染病. 1997(05)
[9]當(dāng)前雞病動(dòng)態(tài)與分析[J]. 傅先強(qiáng).  中國(guó)家禽. 1996(01)
[10]用血細(xì)胞吸附抑制試驗(yàn)快速鑒定雞毒霉形體[J]. 畢丁仁,吳世欽,吳錦.  中國(guó)獸醫(yī)科技. 1990(01)

博士論文
[1]H5N1亞型禽流感病毒NS1蛋白與宿主蛋白PARP10相互作用研究[D]. 于孟斌.中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院 2009
[2]雞毒霉形體黏附素特性鑒定及其雞胚組織互作蛋白的分布研究[D]. 彭秀麗.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2008
[3]禽流感病毒H9N2亞型和雞毒霉形體HS株主要抗原性基因的克隆與表達(dá)研究[D]. 胡思順.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2005

碩士論文
[1]雞毒霉形體黏附素蛋白黏附特性及粘膜免疫研究[D]. 王曉麗.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2010
[2]雞毒霉形體黏附素相互作用蛋白的分離及鑒定[D]. 胡福利.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2009



本文編號(hào)：3575204