病毒是簡單的、具有生態(tài)性的細(xì)胞內(nèi)寄生生物,其復(fù)制的全部過程都須依賴細(xì)胞提供的分子生態(tài)條件。病毒在宿主細(xì)胞復(fù)制增殖所需要的細(xì)胞內(nèi)分子環(huán)境條件,包括細(xì)胞基因組的結(jié)構(gòu)變化、表達(dá)調(diào)控以及宿主因子直接參與病毒的感染、復(fù)制的生命循環(huán)。豬瘟病毒（classical swine fever virus, CSFV）是黃病毒科（Flaviviridae）瘟病毒屬（Pestivirus）重要成員,是有囊膜的單股正鏈RNA病毒。CSFV基因組編碼Erns、E1、E2、C四個結(jié)構(gòu)蛋白和Npro、p7、NS2、NS3、NS4A、NS4B、 NS5A、NS5B等八個非結(jié)構(gòu)蛋白。CSFV感染豬導(dǎo)致以出血性高熱和免疫抑制為主要特征、具有高發(fā)病率和高死亡率的烈性傳染病——豬瘟（classical swine fever, CSF）。目前,CSF仍是危害我國養(yǎng)豬業(yè)最為嚴(yán)重的傳染病。為了鑒定與CSFV NS5A相互作用并參與CSFV復(fù)制的宿主蛋白,本研究利用重組表達(dá)載體pEGX-6p-NS5AC誘導(dǎo)表達(dá)了NS5A碳端蛋白片段（NS5AC）,用重組蛋白GST-NS5AC與PK-15細(xì)胞裂解蛋白共孵育,pull down細(xì)胞蛋... 

【文章來源】：東北大學(xué)遼寧省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 緒論
    1.1 研究背景
    1.2 病毒分子生態(tài)學(xué)
        1.2.1 病毒生態(tài)研究的層次
        1.2.2 病毒分子生態(tài)學(xué)
    1.3 豬瘟病毒及其致病機(jī)理
        1.3.1 豬瘟病毒整體結(jié)構(gòu)
        1.3.2 豬瘟病毒基因組結(jié)構(gòu)特征
        1.3.3 豬瘟病毒編碼的蛋白及其功能
        1.3.4 豬瘟病毒的致病機(jī)理
    1.4 病毒與宿主相互作用的研究概況
        1.4.1 丙型肝炎病毒與宿主相互作用的研究
        1.4.2 HIV病毒與宿主相互作用研究
        1.4.3 牛病毒性腹瀉病毒與宿主相互作用
        1.4.4 豬瘟病毒與宿主蛋白相互作用的研究
    1.5 本論文目標(biāo)及設(shè)計(jì)思路
第2章 實(shí)驗(yàn)部分
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器及設(shè)備
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)器材及有關(guān)溶液的配制
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 PK-15細(xì)胞培養(yǎng)
            2.2.1.1 PK-15細(xì)胞的復(fù)蘇
            2.2.1.2 PK-15細(xì)胞的傳代培養(yǎng)
            2.2.1.3 PK-15細(xì)胞的凍存
        2.2.2 GST-NS5AC的誘導(dǎo)表達(dá)與純化
        2.2.3 pull down
        2.2.4 質(zhì)譜鑒定
        2.2.5 真核表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.2.6 轉(zhuǎn)染PK-15細(xì)胞
        2.2.7 免疫共沉淀
        2.2.8 Westernblot
第3章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論
    3.1 GST-NS5AC的誘導(dǎo)表達(dá)與純化
    3.2 pull down
    3.3 質(zhì)譜鑒定
    3.4 Western blot檢驗(yàn)相互作用蛋白
    3.5 真核表達(dá)載體的構(gòu)建
        3.5.1 NS5AC基因的擴(kuò)增
        3.5.2 NS5AC和pCMV-myc載體的雙酶切
        3.5.3 NS5AC基因和pCMV-myc載體的連接與轉(zhuǎn)化
        3.5.4 重組子PCR陽性鑒定
    3.6 轉(zhuǎn)染及間接免疫熒光檢測
    3.7 免疫共沉淀結(jié)合Western blot
    3.8 討論
第4章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[2]豬瘟病毒及其致病機(jī)制研究進(jìn)展[J]. 田宏,劉湘濤,張彥明,林彤,吳錦艷,謝慶閣.  動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2007(S1)
[3]豬瘟病毒研究進(jìn)展[J]. 陳龍賓.  豬業(yè)科學(xué). 2006(03)
[4]豬瘟病毒非結(jié)構(gòu)蛋白NS2基因不同片段的克隆及在原核系統(tǒng)中的高效表達(dá)[J]. 郭東春,錢平,李祥敏,徐卓菲,姚清俠,金梅林,陳煥春.  中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2006(01)
[5]瘟病毒致細(xì)胞病變的遺傳機(jī)制及其非結(jié)構(gòu)蛋白的功能[J]. 孫世琪,郭慧琛,邱昌慶,劉湘濤.  中國獸醫(yī)科技. 2002(11)
[6]豬瘟病毒生物學(xué)特性研究的一些新進(jìn)展[J]. 羅廷榮.  廣西農(nóng)業(yè)生物科學(xué). 2001(01)



本文編號：3574587