發(fā)布時(shí)間：2022-01-07 03:58

　　禽類(lèi)蛋殼是鳥(niǎo)類(lèi)在進(jìn)化過(guò)程中形成的，對(duì)后代的繁衍有著保護(hù)作用，對(duì)孵化幼雞也有著重要的意義。OC-116（卵功能蛋白）是由子宮合成并分泌的一種基質(zhì)蛋白，主要存在于蛋清和蛋殼的殼膜以及柵欄層中。研究表明OC-116蛋白中間肽段有形成β-折疊的趨勢(shì)，而這種折疊結(jié)構(gòu)間接地控制晶體成核方向和方解石與磷酸鈣生長(zhǎng)以及磷蛋白與羥基磷灰石結(jié)晶的互作等。而目前關(guān)于OC-116蛋白的物理結(jié)構(gòu)及功能還尚不清楚。本實(shí)驗(yàn)依據(jù)原雞OC-116基因序列克隆仙居雞OC-116全長(zhǎng)編碼基因并構(gòu)建了OC-116蛋白相應(yīng)的原核表達(dá)載體。對(duì)OC-116的中間段（即OC-116Z）進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)并純化獲得重組蛋白、制備其多克隆抗體；此外，還進(jìn)一步探索了OC-116Z蛋白的穩(wěn)定性、聚合情況等理化性質(zhì)，為后續(xù)研究OC-116蛋白的結(jié)構(gòu)及功能奠定基礎(chǔ)。主要結(jié)果如下：1.參照原雞（Gallus. gallus）OC-116編碼基因序列并依據(jù)功能區(qū)域設(shè)計(jì)3對(duì)引物，分段克隆了3個(gè)基因片段；測(cè)序正確后通過(guò)酶切連接最終拼接得到OC-116全長(zhǎng)編碼基因；并構(gòu)建了相應(yīng)的原核表達(dá)載體，經(jīng)誘導(dǎo)表達(dá)發(fā)現(xiàn)OC-116的N端（OC-116N）基本無(wú)表達(dá)，中段肽段... 

【文章來(lái)源】：浙江農(nóng)林大學(xué)浙江省

【文章頁(yè)數(shù)】：103 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

OC-116三個(gè)基因片段的PCR擴(kuò)增結(jié)果

圖 2.1 OC-116 三個(gè)基因片段的 PCR 擴(kuò)增結(jié)果Fig. 2.1 PCR products of gene(OC-116)M：DL2000 DNA Marker；1~3,4~5 和 6~7 分別為克隆得到的 OC-116N, OC-116Z 和 OC-116C 基因片段理論上，OC-116N/Z/C 三個(gè)基因片段大小分別為 1200 bp、1005 bp 和 103bp；由圖 2.1 可知，經(jīng)過(guò) PCR 獲得的基因片段大小均在 1000~2000bp，其中 1~的片段均大于 4~5，6~7 的條帶相對(duì)最小，符合理論上 OC-116N/Z/C 目的基因的大小且克隆得到的基因片段濃度也達(dá)到了后續(xù)試驗(yàn)的要求，因此對(duì)其凝膠電泳條帶進(jìn)行凝膠回收。2）OC-116N/Z/C 基因片段與質(zhì)粒 pEGFP-N1 酶切后的電泳結(jié)果

家雞 OC-116Z 的抗體制備及晶體培養(yǎng)表 2.17 凝膠回收后 OC-116N/Z/C 基因片段與質(zhì)粒 pEGFP-N1 酶切產(chǎn)物的 OD 值測(cè)定結(jié)果Table 2.17 OD measurement results of gene fragments and plasmid digested測(cè)量值 λ=230 λ=260 λ=280 260/280 260/230 ng/ulOC-116N 0.601 0.346 0.196 1.77 0.58 17.3OC-116Z 0.470 0.179 0.107 1.67 0.38 8.9OC-116C 0.185 0.224 0.128 1.75 1.21 11.2pEGFP-N1 0.183 0.467 0.239 1.95 2.55 23.43）質(zhì)粒 pEGFP-N1 和目的基因連接前的電泳


本文編號(hào)：3573766