禽類蛋殼是鳥類在進化過程中形成的，對后代的繁衍有著保護作用，對孵化幼雞也有著重要的意義。OC-116（卵功能蛋白）是由子宮合成并分泌的一種基質(zhì)蛋白，主要存在于蛋清和蛋殼的殼膜以及柵欄層中。研究表明OC-116蛋白中間肽段有形成β-折疊的趨勢，而這種折疊結(jié)構(gòu)間接地控制晶體成核方向和方解石與磷酸鈣生長以及磷蛋白與羥基磷灰石結(jié)晶的互作等。而目前關(guān)于OC-116蛋白的物理結(jié)構(gòu)及功能還尚不清楚。本實驗依據(jù)原雞OC-116基因序列克隆仙居雞OC-116全長編碼基因并構(gòu)建了OC-116蛋白相應的原核表達載體。對OC-116的中間段（即OC-116Z）進行誘導表達并純化獲得重組蛋白、制備其多克隆抗體；此外，還進一步探索了OC-116Z蛋白的穩(wěn)定性、聚合情況等理化性質(zhì)，為后續(xù)研究OC-116蛋白的結(jié)構(gòu)及功能奠定基礎(chǔ)。主要結(jié)果如下：1.參照原雞（Gallus. gallus）OC-116編碼基因序列并依據(jù)功能區(qū)域設(shè)計3對引物，分段克隆了3個基因片段；測序正確后通過酶切連接最終拼接得到OC-116全長編碼基因；并構(gòu)建了相應的原核表達載體，經(jīng)誘導表達發(fā)現(xiàn)OC-116的N端（OC-116N）基本無表達，中段肽段... 

【文章來源】：浙江農(nóng)林大學浙江省

【文章頁數(shù)】：103 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

OC-116三個基因片段的PCR擴增結(jié)果

圖 2.1 OC-116 三個基因片段的 PCR 擴增結(jié)果Fig. 2.1 PCR products of gene(OC-116)M：DL2000 DNA Marker；1~3,4~5 和 6~7 分別為克隆得到的 OC-116N, OC-116Z 和 OC-116C 基因片段理論上，OC-116N/Z/C 三個基因片段大小分別為 1200 bp、1005 bp 和 103bp；由圖 2.1 可知，經(jīng)過 PCR 獲得的基因片段大小均在 1000~2000bp，其中 1~的片段均大于 4~5，6~7 的條帶相對最小，符合理論上 OC-116N/Z/C 目的基因的大小且克隆得到的基因片段濃度也達到了后續(xù)試驗的要求，因此對其凝膠電泳條帶進行凝膠回收。2）OC-116N/Z/C 基因片段與質(zhì)粒 pEGFP-N1 酶切后的電泳結(jié)果

家雞 OC-116Z 的抗體制備及晶體培養(yǎng)表 2.17 凝膠回收后 OC-116N/Z/C 基因片段與質(zhì)粒 pEGFP-N1 酶切產(chǎn)物的 OD 值測定結(jié)果Table 2.17 OD measurement results of gene fragments and plasmid digested測量值 λ=230 λ=260 λ=280 260/280 260/230 ng/ulOC-116N 0.601 0.346 0.196 1.77 0.58 17.3OC-116Z 0.470 0.179 0.107 1.67 0.38 8.9OC-116C 0.185 0.224 0.128 1.75 1.21 11.2pEGFP-N1 0.183 0.467 0.239 1.95 2.55 23.43）質(zhì)粒 pEGFP-N1 和目的基因連接前的電泳


本文編號：3573766