發(fā)布時(shí)間：2022-01-07 02:07

　　隨著規(guī)�；�、集約化飼養(yǎng)方式的普及,現(xiàn)代牧業(yè)中高產(chǎn)奶牛疾病的疾病增多明顯,嚴(yán)重危害奶牛業(yè)健康發(fā)展,而奶牛亞急性瘤胃酸中毒（SARA）是高產(chǎn)奶牛的常見疾病,每年造成巨大損失。奶牛亞急性瘤胃酸中毒時(shí),瘤胃內(nèi)產(chǎn)生的大量組胺是導(dǎo)致奶牛產(chǎn)生各種炎癥的重要因素。炎性因子COX-2、IL-6、TNF-α及NF-κB信號(hào)通路與炎癥的產(chǎn)生密切相關(guān)。為研究奶牛瘤胃酸中毒時(shí)血液內(nèi)組胺濃度的變化及對奶牛炎性因子及炎性信號(hào)通路的影響,本試驗(yàn)通過對健康奶牛飼喂高精料日糧,誘發(fā)亞急性瘤胃酸中毒,促使瘤胃內(nèi)大量產(chǎn)生組胺,手術(shù)安裝血管瘺管采集門靜脈和肝靜脈血液樣品,通過檢測血液中組胺含量及COX-2含量,并通過RT-PCR對在體肝臟中的COX-2、NF-κB、IL-6、TNF-α表達(dá)水平進(jìn)行相對定量和絕對定量檢測,為組胺對奶牛炎性信號(hào)通路產(chǎn)生的影響提供一定的依據(jù)。1.不同日糧精粗比對奶牛組胺和COX-2產(chǎn)生的影響隨機(jī)選取6頭泌乳期的成年健康奶牛,隨機(jī)分組,采用2×2的拉丁方設(shè)計(jì),對兩組奶牛分別飼喂等能等氮的高精料日糧和低精料日糧,誘發(fā)亞急性瘤胃酸中毒,手術(shù)安裝血管瘺管采集門靜脈和肝靜脈血液樣品,組胺Elisa試劑盒檢測血... 

【文章來源】：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：77 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－１．由ＯＲＡＩｌ介導(dǎo)的ＮＦ－ｋ?Ｂ信號(hào)通路在組胺導(dǎo)致ｃｏｘ－２活化中的作用的圖??示

圖３－１肝靜脈和口靜脈在肝化內(nèi)的分支??Ｆｉｇ．３－１?Ｂｒａｎｃｈ?ｏｆ?化ｅ?ｈｅｐａｔｉｃ?ｖｅｉｎ?ａｎｄ?ｐｏｒｔａｌ?ｖｅｉｎ?ｉｎ?化ｅ?ｌｉｖｅｒ??樣品的米集??ｌ無菌注射器的針尖剪去０．２?ｃｍ，然后磨平，分別插入巧靜抽掉血管湊內(nèi)的肝素后，吸取肝靜脈血和口靜脈血，注入真空采血管使注射器內(nèi)的血液慢慢流入。迅速將真空采血管。超低溫離屯、機(jī)４?°Ｃ、３０００?ｒｐｍ離必２０?ｍｉｎ，吸取上清，－２０?ｒ冰箱保存、待測。??組胺濃度的測定??胺濃度測定的方法主要參考牛組胺Ｅｌｉｓａ試劑盒（上�？婆d行，步驟如下；??

３．１?Ｃ０Ｘ－２、ＮＦ－ＫＢ、圧－６和ＴＮＦ?ａ的民Ｔ－ＰＣ民擴(kuò)增結(jié)果??３．?１．１?ＲＮＡ瓊脂糖凝膠電泳??提取總ＲＮＡ瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果如圖４－１，２８?Ｓ和１８?Ｓ條帶清晰，沒有脫尾現(xiàn)??象，灰度比約為２；?１，表明所提ＲＮＡ完整，質(zhì)量可靠。同時(shí)分光光度計(jì)檢測結(jié)??果也顯示，在２６０?ｎｍ和２８０?ｎｍＲＮＡ的紫外吸光度比值在１．８－２．０之間，說明ＲＮＡ??無降解，純度較高，可用于后繼相關(guān)實(shí)驗(yàn)。??■—２８Ｓ??一??ｉｏｏ??－巧??圖４－１總ＲＮＡ掠脂糖凝膠電泳??Ｆｉｇ?４－１?ａｇａｒｏｓｅ?ｇｅｌ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ｏｆ?ｔｏｔａｌ?ＲＮＡ??３．?１．２?Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ?ＰＣＲ?擴(kuò)增曲線??由圖４－２至圖４－５可見，各基因的融解曲線均為單峰，無異常峰出現(xiàn)，也沒有??出現(xiàn)主峰的異常增寬；且擴(kuò)増曲線均呈標(biāo)準(zhǔn)的＂Ｓ＂形。說明試驗(yàn)ＰＣＲ產(chǎn)物較純、??未出現(xiàn)污染、引物二聚體和非特異性的擴(kuò)增，可Ｗ進(jìn)行后續(xù)的定量分析。??．械減??‘?ｆ??—?Ｊ??？?：?＞?？?？?巧：巧??ＳＭ??儀曲Ｊ！擬Ｗ泌ＵＷ卽ｆ撲‘＂Ｓ??４４??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]奶牛蹄底潰瘍發(fā)病機(jī)理和治療試驗(yàn)研究[D]. 羅安智.中國農(nóng)業(yè)大學(xué) 2005

碩士論文
[1]肥胖與非肥胖2型糖尿病患者外周血C-反應(yīng)蛋白、腫瘤壞死因子-α和白介素-1β水平的比較研究[D]. 王露.中國醫(yī)科大學(xué) 2006
[2]南京地區(qū)奶牛隱性乳房炎流行調(diào)查與病原分析及PCR檢測[D]. 鄭浩.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2004



本文編號(hào)：3573593