近幾年發(fā)現(xiàn)的抑制骨骼肌生長的負(fù)調(diào)控因子--肌肉生長抑制素（Myostatin, MSTN）,在遺傳突變后,導(dǎo)致基因功能的失活,進(jìn)而引起動物肌肉過度發(fā)育,肌纖維數(shù)量增多,直徑增加,肌肉量急劇增加,動物表現(xiàn)為“雙肌”眭狀。于是,研究者們通過對肌抑素基因進(jìn)行敲除、缺失,突變等基因修飾,來獲得基因敲除的動物模型和克隆動物,以達(dá)到醫(yī)學(xué)上和農(nóng)業(yè)上的需求。對于本研究來說,蒙古羊是內(nèi)蒙古自治區(qū)的優(yōu)勢物種之一,培育產(chǎn)肉性狀優(yōu)良,產(chǎn)肉率高的蒙古羊?qū)τ谧灾螀^(qū)的家畜育種具有重要意義。本研究選用妊娠30天的蒙古羊胎兒為材料,通過組織塊貼壁法成功建立蒙古羊胎兒成纖維細(xì)胞系,用于MSTN基因的打靶實(shí)驗(yàn)。同時(shí)利用基因敲除技術(shù)在體外構(gòu)建了針對蒙古羊MSTN基因的第三外顯子缺失的敲除載體。主要構(gòu)建了兩個(gè)帶有篩選標(biāo)記的置換型載體和一個(gè)無篩選標(biāo)記的TALEN敲除載體。主要結(jié)果如下1、委托華大基因測序公司對蒙古羊肌抑素基因進(jìn)行測序,得到測序結(jié)果后與Genebank上發(fā)布的Ovies的MSTN基因序列進(jìn)行比對,設(shè)計(jì)引物,成功克隆出蒙古羊肌抑素基因。2、設(shè)計(jì)引物,利用PCR技術(shù),成功擴(kuò)增到蒙古羊MSTN基因的兩種同源長臂,大小分別... 

【文章來源】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)內(nèi)蒙古自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：146 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

MSTN基因及蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)簡圖（下圖中的9個(gè)圓圈表示保守的半膚氧酸位點(diǎn)）t”Fig.1SluclurediagramofMSTNgenieandprotein

ilFN 二聚體結(jié)合特碎丨)NA序列圖2鋒指核酸酶作用方式結(jié)構(gòu)圖Fig. 2 The structure picture of process of zinc finger nucleases1.2.2基因打IE技術(shù)的原理基因打把是在同源重組的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的。同源重組是通過兩條同源染色

圖3置換型載體與插入型載體的基本結(jié)構(gòu)[‘'】Fig.3 '1 he basic structure of the displacement voclor and ihc insertion vector注：載體中的組線部分代表K位點(diǎn)的通原序列，細(xì)線部分則代表載體1:質(zhì)粒的序列；方形為祀裡因外+ -分&.】代表正負(fù)選擇蹄選基因；置換型載體在細(xì)胞轉(zhuǎn)染前先進(jìn)行線性化.插入型錢體在轉(zhuǎn)染細(xì)胞前現(xiàn)序列內(nèi)部迪行海切斷裂，產(chǎn)生《鏈的斷裂部分。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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本文編號：3571589