DLK1-GTL2印記區(qū)域在人、小鼠等多個物種的胚胎發(fā)育過程起重要作用,而該區(qū)域發(fā)現(xiàn)的一個A/G突變被認為是導致美臀（Callipyge, CLPG）羊后肢肌肉肥大表型的致因突變。遺傳獲得父源Callipyge突變的雜合子后代才能表現(xiàn)出肌肉肥大表型,而同時獲得父源和母源Callipyge突變的純合子個體表型為“野生型”,這種非孟德爾式的遺傳方式被稱作極性超顯性。根據(jù)多年的研究推斷Callipyge突變發(fā)揮順式調控和反式調控作用來調節(jié)基因表達,而這種調節(jié)及其誘發(fā)Callipyge表型的潛在機制仍然不得而知。DLK1和PEG11被認為是誘發(fā)Callipyge肌肉肥大表型的功能基因,antiPEG11轉錄本加工形成的miRNA對PEG11轉錄本切割的反式調控已經(jīng)得到證實,但是針對DLK1的反式調控機制尚不清楚。Callipyge突變的純合子個體與Callipyge突變個體相比,骨骼肌組織中DLK1蛋白水平和核酸水平的表達分別下降～10和～3倍,而鑒于miRNA基因往往在轉錄后水平影響靶基因的表達,因此DLK1-GTL2印記區(qū)域表達的miRNA成為參與DLK1反式調控的首要候選。本研究中以蛋白... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：107 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
縮略詞表
1 前言
    1.1 研究問題的由來
    1.2 文獻綜述
        1.2.1 Callipyge及其研究進展
        1.2.2 DLK1-GTL2區(qū)域相關miRNA的研究進展
    1.3 研究目的和意義
2 材料與方法
    2.1 本研究的技術路線
    2.2 材料
        2.2.1 樣品
        2.2.2 用于DLK1親和力評估的DLK1-GTL2區(qū)域miRNA模擬物
        2.2.3 用于DLK1親和力評估的DLK1的轉錄本序列
        2.2.4 構建GTL2表達載體的GTL2轉錄本序列
    2.3 方法
        2.3.1 綿羊DLK1基因的RACE擴增
        2.3.2 表達載體的構建
        2.3.3 miRNA模擬物系統(tǒng)的選擇
        2.3.4 miRNA模擬物的分子設計
        2.3.5 模擬物序列的選擇
        2.3.6 細胞培養(yǎng)和瞬時轉染
        2.3.7 雙熒光Western blotting
        2.3.8 DLK1蛋白的去糖基化處理
        2.3.9 DLK1轉錄本的Northern blot分析
        2.3.10 miRNA對DLK1親和力的計算
3 結果
    3.1 綿羊DLK1基因C2轉錄本的表達載體的構建和鑒定
    3.2 成熟miRNA表達的設計
    3.3 DLK1-GTL2區(qū)域單個miRNA對DLK1親和力的測定
    3.4 121個miRNA對DLK1親和力評估結果的生物學相關性
    3.5 GTL2對DLK1的可能調控作用研究
4 討論
    4.1 DLK1雙熒光western blot檢測方法的建立
    4.2 DLK1-GTL2印記區(qū)域miRNA的功能分析
    4.3 DLK1-GTL2區(qū)域的miRNA中對DLK1親和力的研究
5 結論
    5.1 本論文的主要研究結果及結論
    5.2 本研究的創(chuàng)新點與特色
    5.3 本研究的不足之處及值得進一步研究的問題
6 其它工作：豬TCAP基因的克隆與表達譜分析
    6.1 文獻綜述
        6.1.1 骨骼肌形成過程中的肌節(jié)組裝
        6.1.2 TCAP基因研究進展
    6.2 材料與方法
        6.2.1 材料
        6.2.2 方法
    6.3 結果
        6.3.1 豬TCAP基因的分子克隆和鑒定
        6.3.2 豬TCAP基因的表達譜分析
        6.3.3 豬TCAP基因多態(tài)性和等位基因頻率的檢測
    6.4 討論
參考文獻
致謝
附錄1：p3.1M-DLK1-HA表達載體中轉錄形成的RNA序列
附錄2：構建GTL2表達載體的綿羊GTL2序列
附錄3：表1說明
附錄4：表3說明



本文編號：3570327