本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，乳酸乳球菌Lactococcus lactis1.2472組成型大量表達(dá)一類胞外分泌蛋白，分子量約為50kDa。質(zhì)譜分析顯示，該類蛋白中分值最高的是一種名為Usp45的蛋白，編碼基因?yàn)閡sp45基因（登錄號(hào)：M60178.1）。目前，該蛋白功能未知；但其分泌信號(hào)肽常用于構(gòu)建分泌型表達(dá)載體。本實(shí)驗(yàn)對(duì)乳酸乳球菌usp45基因進(jìn)行原核表達(dá)，研究該基因及其編碼蛋白的功能，并利用基因的相關(guān)序列構(gòu)建乳酸菌整合型表達(dá)載體；為以乳酸菌作為黏膜免疫遞送載體的研究奠定基礎(chǔ)。首先，本論文從乳酸乳球菌Lactococcus lactis1.2472基因組中PCR擴(kuò)增1371bp長(zhǎng)度的usp45基因，與pMD-18T Simple載體連接獲得克隆質(zhì)粒pT-usp45。BamH I/EcoR I雙酶切鑒定并測(cè)序鑒定正確后，將usp45基因克隆入原核表達(dá)載體pET-28a，獲得表達(dá)質(zhì)粒pET-28a-usp45。將pET-28a-usp45轉(zhuǎn)入E.coli BL21（DE3）獲得重組菌，經(jīng)由IPTG誘導(dǎo)表達(dá)分子量約50kDa的蛋白。SDS-PAGE分析和Westen blot鑒定確認(rèn)該蛋白即為... 

【文章來(lái)源】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)吉林省

【文章頁(yè)數(shù)】：79 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
前言
第一篇 乳酸菌作為黏膜靶位遞送載體研究進(jìn)展
    1.1 LAB 作為有益的傳遞載體
    1.2 乳球菌（L．lactis）作為活的遞送載體
    1.3 乳酸桿菌（Lactobacillus spp.）作為活性載體
    1.4 小結(jié)
第二篇 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容
    第一章 usp45 基因的克隆與原核表達(dá)
        1.1 材料
        1.2 方法
        1.3 結(jié)果與分析
        1.4 討論
        1.5 小結(jié)
    第二章 Usp45 蛋白的大量表達(dá)與層析純化
        2.1 材料
        2.2 方法
        2.3 結(jié)果與分析
        2.4 討論
        2.5 小結(jié)
    第三章 Usp45 蛋白的結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)與功能研究
        3.1 材料
        3.2 方法
        3.3 結(jié)果與分析
        3.4 討論
        3.5 小結(jié)
    第四章 Usp45 基因相關(guān)序列在表達(dá)載體構(gòu)建中的應(yīng)用
        4.1 材料
        4.2 方法
        4.3 結(jié)果與分析
        4.4 討論
        4.5 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
作者簡(jiǎn)介
致謝



本文編號(hào)：3569047