本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，乳酸乳球菌Lactococcus lactis1.2472組成型大量表達一類胞外分泌蛋白，分子量約為50kDa。質譜分析顯示，該類蛋白中分值最高的是一種名為Usp45的蛋白，編碼基因為usp45基因（登錄號：M60178.1）。目前，該蛋白功能未知；但其分泌信號肽常用于構建分泌型表達載體。本實驗對乳酸乳球菌usp45基因進行原核表達，研究該基因及其編碼蛋白的功能，并利用基因的相關序列構建乳酸菌整合型表達載體；為以乳酸菌作為黏膜免疫遞送載體的研究奠定基礎。首先，本論文從乳酸乳球菌Lactococcus lactis1.2472基因組中PCR擴增1371bp長度的usp45基因，與pMD-18T Simple載體連接獲得克隆質粒pT-usp45。BamH I/EcoR I雙酶切鑒定并測序鑒定正確后，將usp45基因克隆入原核表達載體pET-28a，獲得表達質粒pET-28a-usp45。將pET-28a-usp45轉入E.coli BL21（DE3）獲得重組菌，經由IPTG誘導表達分子量約50kDa的蛋白。SDS-PAGE分析和Westen blot鑒定確認該蛋白即為... 

【文章來源】：吉林農業(yè)大學吉林省

【文章頁數(shù)】：79 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
前言
第一篇 乳酸菌作為黏膜靶位遞送載體研究進展
    1.1 LAB 作為有益的傳遞載體
    1.2 乳球菌（L．lactis）作為活的遞送載體
    1.3 乳酸桿菌（Lactobacillus spp.）作為活性載體
    1.4 小結
第二篇 實驗內容
    第一章 usp45 基因的克隆與原核表達
        1.1 材料
        1.2 方法
        1.3 結果與分析
        1.4 討論
        1.5 小結
    第二章 Usp45 蛋白的大量表達與層析純化
        2.1 材料
        2.2 方法
        2.3 結果與分析
        2.4 討論
        2.5 小結
    第三章 Usp45 蛋白的結構預測與功能研究
        3.1 材料
        3.2 方法
        3.3 結果與分析
        3.4 討論
        3.5 小結
    第四章 Usp45 基因相關序列在表達載體構建中的應用
        4.1 材料
        4.2 方法
        4.3 結果與分析
        4.4 討論
        4.5 小結
結論
參考文獻
作者簡介
致謝



本文編號：3569047