關(guān)節(jié)軟骨類疾病作為一類嚴(yán)重影響動(dòng)物及人類健康的疾病,成為當(dāng)今醫(yī)學(xué)、科學(xué)及社會普遍關(guān)注的問題。這類疾病的發(fā)生發(fā)展主要是由于各種致病因子作用于機(jī)體,導(dǎo)致軟骨組織損傷所致,但因?yàn)殛P(guān)節(jié)部位的特殊解剖學(xué)結(jié)構(gòu),使得當(dāng)前預(yù)防和治療該病較為棘手。淫羊藿甙作為淫羊藿的主要單體之一,現(xiàn)代科學(xué)研究發(fā)現(xiàn)其能夠通過激活細(xì)胞MAPKs通路而促進(jìn)成骨細(xì)胞及軟骨細(xì)胞的增殖、分化,抑制細(xì)胞凋亡,從而對骨損傷具有著明顯的改善作用。但淫羊藿甙對關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞的作用及作用機(jī)制尚完全清楚,因此本試驗(yàn)借助細(xì)胞培養(yǎng)、組織學(xué)、免疫組織化學(xué)、流式細(xì)胞儀等技術(shù)來研究淫羊藿甙對關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞增殖、凋亡及NO/NOS、MMP-13分泌的影響。同時(shí)運(yùn)用Western-Blot技術(shù)探究淫羊藿甙對關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞MAPKs通路的作用及調(diào)控機(jī)理,從而為臨床應(yīng)用淫羊藿甙防治軟骨細(xì)胞類疾病提供相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)。本試驗(yàn)以健康豬的膝關(guān)節(jié)為材料,利用酶消化法分離培養(yǎng)了豬的關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞,建立了豬關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞的高效體外培養(yǎng)方法。同時(shí)利用細(xì)胞學(xué)、HE染色、Ⅱ型膠原免疫組化及超微結(jié)構(gòu)觀察等方法對分離培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行了鑒定,發(fā)現(xiàn)采用酶消化法分離培養(yǎng)的細(xì)胞長勢良好,形態(tài)、密度正常,... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
前言
    1 淫羊藿甙作用的研究進(jìn)展
    2 關(guān)節(jié)軟骨類疾病的研究概述
        2.1 NO/NOS在軟骨細(xì)胞中的作用
        2.2 MMP-13在軟骨細(xì)胞中的作用
    3 MAPKs通路的研究進(jìn)展
        3.1 ERK1/2信號通路
        3.2 p38MAPK信號通路
        3.3 JNK信號通路
    本研究目的及意義
材料與方法
    1 材料
        1.1 ICA
        1.2 試驗(yàn)用軟骨
        1.3 主要試劑耗材
        1.4 主要溶液
        1.5 主要儀器設(shè)備
    2 方法
        2.1 ICA的配制
        2.2 原代豬關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞的分離培養(yǎng)
        2.3 原代豬關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞的鑒定
        2.4 ICA對關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞增殖影響的測定
        2.5 ICA對關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞周期影響的檢測
        2.6 ICA對關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞凋亡影響的檢測
        2.7 ICA對關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞分泌NO及NOS影響的檢測
        2.8 ICA對關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞分泌MMP-13影響的檢測
        2.9 ICA對關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞MAPKs通路作用的檢測
        2.10 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與處理
試驗(yàn)結(jié)果
    1 原代豬關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞的分離培養(yǎng)
        1.1 原代細(xì)胞的培養(yǎng)
        1.2 傳代細(xì)胞的培養(yǎng)
    2 原代豬關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞的鑒定
        2.1 軟骨細(xì)胞HE染色
        2.2 軟骨細(xì)胞甲苯胺藍(lán)染色
        2.3 軟骨細(xì)胞Ⅱ型膠原免疫組化
        2.4 軟骨細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)觀察
    3 ICA對關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞增殖的影響
    4 ICA對關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞周期的影響
    5 ICA對關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞凋亡的影響
    6 ICA對關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞分泌NO及NOS的影響
    7 ICA對關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞分泌MMP-13的影響
    8 ICA對關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞MAPKs通路的作用
        8.1 蛋白質(zhì)的定量(BCA定量法)
        8.2 MAPKs(ERK1/2、P38)通路蛋白的表達(dá)
討論
    1 豬關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞的原代分離培養(yǎng)
    2 ICA對關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞增殖的影響
    3 ICA對關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞周期及凋亡的影響
    4 ICA對關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞分泌NO、NOS及MMP-13的影響
    5 ICA對關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞MAPKs的作用
    6 ICA對關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞調(diào)控的可能機(jī)制
結(jié)論
附錄1 流式細(xì)胞儀檢測關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞周期
附錄2 流式細(xì)胞儀檢測關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞凋亡
參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3566518