本論文旨在通過(guò)檢測(cè)Wnt/β-catenin信號(hào)通路相關(guān)基因mRNA在絨山羊絨毛周期性再生及著色過(guò)程中的表達(dá)，為進(jìn)一步探究并闡明Wnt/β-catenin信號(hào)通路在絨毛周期性再生及著色過(guò)程中的作用及分子機(jī)理奠定基礎(chǔ)。本論文克隆Wnt/β-catenin信號(hào)通路中與毛干長(zhǎng)度相關(guān)的基因Wnt3，并對(duì)其核苷酸、編碼氨基酸序列進(jìn)行生物信息學(xué)分析及原核表達(dá)；采取實(shí)時(shí)熒光定量技術(shù)對(duì)Wnt/β-catenin信號(hào)通路上游基因Wnt3、β-catenin、Lef1/Tcf3及Dkk1基因mRNA在白色絨山羊絨毛生長(zhǎng)不同時(shí)期及黑、白色絨山羊絨毛生長(zhǎng)旺盛期時(shí)體側(cè)部皮膚組織中的相對(duì)表達(dá)量進(jìn)行測(cè)定；采用實(shí)時(shí)熒光定量技術(shù)對(duì)Wnt/β-catenin信號(hào)通路中與毛色相關(guān)的靶基因MITF、ASIP及TYR家族基因mRNA在黑、白絨山羊絨毛生長(zhǎng)旺盛時(shí)體側(cè)部皮膚組織中的表達(dá)量進(jìn)行檢測(cè)。試驗(yàn)結(jié)果如下：（1）絨山羊Wnt3基因CDS區(qū)全長(zhǎng)1068bp，共編碼355個(gè)氨基酸；不同物種間Wnt3基因CDS區(qū)序列相似性極高（90%以上）；編碼多肽分子式為C1733H2688N508O510S29,分子量約為40kDa，等電點(diǎn)為7... 

【文章來(lái)源】：西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：66 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 調(diào)控毛囊生長(zhǎng)發(fā)育信號(hào)通路研究進(jìn)展
    1.1 前言
    1.2 毛囊生理學(xué)
    1.3 調(diào)控毛囊發(fā)育相關(guān)通路研究進(jìn)展
        1.3.1 Wnt/β-catenin 信號(hào)通路
        1.3.2 BMP 信號(hào)通路
        1.3.3 SHH 信號(hào)通路
        1.3.4 Notch 信號(hào)通路
    1.4 研究問(wèn)題的提出及擬解決的問(wèn)題
        1.4.1 研究問(wèn)題的提出
        1.4.2 本文擬研究的問(wèn)題
第二章 Wnt3 基因 CDS 區(qū)克隆、生物信息分析及原核表達(dá)
    2.1 材料與試劑
        2.1.1 試驗(yàn)材料
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑與菌株
        2.1.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器
    2.2 Wnt3 基因 CDS 區(qū)克隆
        2.2.1 皮膚組織 RNA 的提取及質(zhì)量、濃度檢測(cè)
        2.2.2 第一鏈 cDNA 的合成
        2.2.3 Wnt3 基因 CDS 區(qū)克隆引物設(shè)計(jì)
        2.2.4 RT-PCR 擴(kuò)增絨山羊 Wnt3 基因 CDS 區(qū)
        2.2.5 絨山羊 Wnt3 基因 CDS 區(qū)的電泳檢測(cè)
        2.2.6 絨山羊 Wnt3 基因 CDS 區(qū)克隆及測(cè)序
        2.2.7 Wnt3 基因 CDS 區(qū)及編碼蛋白質(zhì)生物信息學(xué)分析
    2.3 絨山羊 Wnt3 基因編碼蛋白的原核表達(dá)
        2.3.1 Wnt3 原核表達(dá)引物的設(shè)計(jì)
        2.3.2 重組質(zhì)粒的構(gòu)建
        2.3.3 絨山羊 Wnt3 基因編碼蛋白的誘導(dǎo)原核表達(dá)及檢測(cè)
    2.4 結(jié)果與分析
        2.4.1 皮膚組織總 RNA 的提取
        2.4.2 Wnt3 基因 CDS 區(qū)的克隆
        2.4.3 絨山羊 Wnt3 基因及其編碼氨基酸生物信息學(xué)分析
        2.4.4 Wnt3 基因的原核表達(dá)
    2.5 討論
    2.6 小結(jié)
第三章 Wnt/β-catenin 信號(hào)通路上游基因在絨毛周期性再生及著色過(guò)程中表達(dá)分析
    3.1 材料和方法
        3.1.1 樣品采集
        3.1.2 主要試劑與儀器
        3.1.3 皮膚組織總 RNA 提取及 cDNA 第一鏈合成
        3.1.4 Wnt/β-catenin 通路上游基因在不同月份絨山羊皮膚組織中的表達(dá)
        3.1.5 Wnt/β-catenin 通路上游基因在不同毛色絨山羊皮膚組織中的表達(dá)
        3.1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 Wnt/β-catenin 信號(hào)通路上游基因在不同月份絨山羊皮膚中的表達(dá)
        3.2.2 Wnt/β-catenin 信號(hào)通路上游基因在不同毛色絨山羊皮膚中的表達(dá)
    3.3 討論
        3.3.1 Wnt/β-catenin 信號(hào)通路在絨山羊絨毛周期性再生的作用
        3.3.2 Wnt/β-catenin 信號(hào)通路在絨山羊絨毛著色過(guò)程中的作用
    3.4 小結(jié)
第四章 MITF、ASIP 及 TYR 家族基因在黑色和白色絨山羊皮膚組織中的表達(dá)
    4.1 材料和方法
        4.1.1 試驗(yàn)材料
        4.1.2 主要試劑與儀器
        4.1.3 皮膚組織總 RNA 提取及 cDNA 第一鏈合成
        4.1.4 MITF、ASIP 及 TYR 家族等基因在不同毛色絨山羊皮膚組織中的表達(dá)
        4.1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
    4.2 結(jié)果與分析
        4.2.1 皮膚組織 RNA 的提取
        4.2.2 MITF、ASIP 及 TYR 家族基因在不同毛色絨山羊皮膚組織中的表達(dá)
    4.3 討論
        4.3.1 MITF 基因 mRNA 表達(dá)量與絨毛顏色關(guān)系
        4.3.2 ASIP 基因 mRNA 表達(dá)量與絨毛顏色關(guān)系
        4.3.3 TYR 家族基因 mRNA 表達(dá)與絨毛顏色關(guān)系
    4.4 小結(jié)
結(jié)論
    5.1 結(jié)論
    5.2 需要進(jìn)一步研究的問(wèn)題
參考文獻(xiàn)
附錄
    附錄 1 皮膚組織 RNA 的提取
    附錄 2 cDNA 第一鏈合成
    附錄 3 凝膠回收
    附錄 4 感受態(tài)細(xì)胞制備
    附錄 5 TA 克隆
    附錄 6 質(zhì)粒提取
    附錄 7 誘導(dǎo)原核表達(dá)
    附錄 8 SDS-PAGE 凝膠電泳
致謝
作者簡(jiǎn)介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]過(guò)表達(dá)Wnt3基因抑制肝前體細(xì)胞凋亡[J]. 張錫峰,胡代曦,張超,鐘沁,馮濤,黃佳祎.  南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2014(01)
[2]論我國(guó)山羊絨產(chǎn)業(yè)發(fā)展的思路與對(duì)策[J]. 程廣燕.  中國(guó)畜牧雜志. 2011(16)
[3]毛囊黑素譜系細(xì)胞中β-catenin在毛囊周期中的表達(dá)[J]. 鄧芳,郭海英,連小華,楊恬.  第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào). 2011(08)
[4]內(nèi)蒙古絨山羊毛囊發(fā)育不同時(shí)期皮膚中BMP4基因的表達(dá)[J]. 吳江鴻,張文廣,李金泉,閆祖威.  黑龍江畜牧獸醫(yī). 2009(23)
[5]中國(guó)絨山羊業(yè)發(fā)展現(xiàn)狀、前景與對(duì)策[J]. 周占琴.  中國(guó)畜牧雜志. 2008(04)
[6]內(nèi)蒙古罕山白絨山羊毛囊生長(zhǎng)規(guī)律的研究[J]. 金鳳,李金泉,劉東軍,烏云格日樂(lè),韓強(qiáng).  中國(guó)草食動(dòng)物. 2008(01)
[7]骨形態(tài)發(fā)生蛋白2（BMP2）基因在內(nèi)蒙古絨山羊不同時(shí)期皮膚毛囊中的表達(dá)[J]. 蘇蕊,李金泉,張文廣,尹俊,趙珺,常子麗.  中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué). 2008(02)
[8]Agouti在不同顏色被毛羊駝皮膚組織中的表達(dá)[J]. 姜俊兵,趙志軍,賀俊平,謝建山,董常生.  畜牧與獸醫(yī). 2007(04)
[9]我國(guó)山羊絨生產(chǎn)現(xiàn)狀及山羊絨標(biāo)準(zhǔn)中存在的問(wèn)題淺析[J]. 郭天芬,王欣榮,高雅琴.  畜牧獸醫(yī)科技信息. 2007(01)
[10]內(nèi)蒙古絨山羊105d胎兒皮膚的基因表達(dá)[J]. 尹俊,李金泉,郭志成,李長(zhǎng)青,張燕軍.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2005(11)

碩士論文
[1]Wnt通路關(guān)鍵基因在絨山羊絨毛生長(zhǎng)一個(gè)周期中的表達(dá)研究[D]. 劉維.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 2010



本文編號(hào)：3563072