朊病毒感染后可觀察到中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎癥細(xì)胞的活化和多種細(xì)胞因子的含量升高,但一些低豐度和不常見的細(xì)胞因子卻鮮有報(bào)道。為了評(píng)估朊病毒感染過程中罕見細(xì)胞因子的潛在變化,我們利用Luminex方法分析篩選了感染不同羊瘙癢因子的小鼠腦組織17種細(xì)胞因子的含量。結(jié)果發(fā)現(xiàn)干擾素誘導(dǎo)的蛋白10（IP10）、角質(zhì)形成細(xì)胞趨化因子（KC）和巨噬細(xì)胞集落刺激因子（M-CSF）在朊病毒感染小鼠腦組織中含量上調(diào),隨后利用三種細(xì)胞因子的商品化ELISA試劑盒和特異性免疫組織化學(xué)方法進(jìn)行了驗(yàn)證。通過特異性熒光定量PCR方法檢測(cè)IP10、M-CSF和KC,發(fā)現(xiàn)三種細(xì)胞因子在朊病毒感染小鼠終末期腦組織中的轉(zhuǎn)錄水平異常升高,應(yīng)用數(shù)字PCR技術(shù)確認(rèn)了IP10在多種羊瘙癢因子感染小鼠腦組織中轉(zhuǎn)錄水平上調(diào)。對(duì)朊病毒感染后不同時(shí)間點(diǎn)采集的腦組織進(jìn)行動(dòng)態(tài)分析發(fā)現(xiàn),三種細(xì)胞因子的含量隨病程呈時(shí)間依賴性增加,在感染終末期動(dòng)物腦組織中IP10含量的增加尤為明顯。此外,研究發(fā)現(xiàn)45例散發(fā)型克-雅病患者腦脊液中IP10的含量雖然組內(nèi)差異較大,但整體明顯高于非朊病毒病患者。為揭示IP10與朊病毒病之間的關(guān)系及其在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的分布規(guī)律,我們利... 

【文章來源】：黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)黑龍江省

【文章頁數(shù)】：110 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

ELISA方法分析IP10、KC、M-CSF在不同朊病毒感染小鼠腦組織中的水平（n=3）

結(jié)果與分析49種Balb/c小鼠，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。上述結(jié)果提示IP10、KC、M-CSF在朊病毒感染終末期動(dòng)物模型腦組織中的轉(zhuǎn)錄水平顯著升高（圖3-2A）。為了進(jìn)一步的驗(yàn)證朊病毒感染后細(xì)胞因子IP10、KC、M-CSF轉(zhuǎn)錄水平的變化，我們選取了在熒光定量PCR檢測(cè)中轉(zhuǎn)錄水平變化最顯著的IP10按照實(shí)驗(yàn)步驟2.2.8進(jìn)行數(shù)字PCR的檢測(cè)，結(jié)果顯示，以雙蒸水為基線，IP10在健康對(duì)照組的平均拷貝數(shù)為0.1cp/μL，在羊瘙癢癥感染因子139A和ME7感染C57BL/6小鼠終末期的腦組織中的平均拷貝數(shù)分別為2.31cp/μL和9.91cp/μL，IP10在朊病毒感染小鼠終末期腦組織的轉(zhuǎn)錄水平顯著升高，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（圖3-2B）。圖3-2RT-PCR及數(shù)字PCR方法分析IP10、KC、M-CSF在不同朊病毒毒株感染小鼠模型中轉(zhuǎn)錄水平（n=3）Fig.3-2ComparativeanalysisofthebraintranscriptionallevelsofIP10,KCandM-CSFinvariousscrapieinfectedmousemodelswithReal-timePCR(A)andDigitalPCR(B)（n=3）.

結(jié)果與分析51圖3-3免疫組織化學(xué)分析IP10、KC、M-CSF在羊瘙癢因子139A感染小鼠腦組織中的分布特征（100倍，n=3，白色箭頭為陽性信號(hào)）Fig.3-3IHCassaysofthedistributionsofIP10(A),KC(B)andM-CSF(C)incorticalregionsof139A-infectedmousemodels(100×,n=3,Thewhitearrowisapositivesignal).3.1.5朊病毒感染過程中腦組織IP10、KC、M-CSF的動(dòng)態(tài)表達(dá)水平為進(jìn)一步驗(yàn)證朊病毒感染過程中IP10、KC、M-CSF的動(dòng)態(tài)變化規(guī)律，本研究選取了羊瘙癢因子139A、ME7感染C57小鼠第86天、117天、147天、183天的腦組織進(jìn)行分析，同時(shí)利用Luminex200方法和ELISA進(jìn)行平行檢測(cè)。Luminex檢測(cè)結(jié)果顯示，在羊瘙癢因子139A、ME7感染C57小鼠的第86天、117天、147天、183天腦組織中IP10的含量持續(xù)升高，117天時(shí)腦組織IP10的含量呈現(xiàn)顯著升高的趨勢(shì)，147天時(shí)ME7感染的腦組織和183天時(shí)139A感染的腦組織中含量雖有下降，但

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]散發(fā)性克-雅氏病患者腦脊液中抗炎性細(xì)胞因子IL-4水平的檢測(cè)[J]. 樊麗超,趙節(jié)緒,王東升,左秀美,南善姬.  中風(fēng)與神經(jīng)疾病雜志. 2006(06)



本文編號(hào)：3562559