體細(xì)胞克隆技術(shù)是一種具有廣闊應(yīng)用前景的家畜遺傳改良技術(shù),故而成為當(dāng)今生物技術(shù)的研究熱點。然而,目前體細(xì)胞克隆的效率還很低,主要表現(xiàn)在克隆胚胎發(fā)育率低,移植后妊娠率低、流產(chǎn)率高、胎盤異�；虺錾鷥后w重過大等問題,使得體細(xì)胞克隆技術(shù)在實際生產(chǎn)應(yīng)用中受到限制。有研究表明,異常的表觀遺傳修飾是克隆胚胎效率低的主要原因,而組蛋白乙�；虳NA甲基化修飾是表觀遺傳修飾的兩個重要方面。因此,本研究系統(tǒng)探討了組蛋白去乙�；敢种苿㏒criptaid對水牛體細(xì)胞核移植重構(gòu)胚發(fā)育潛能及胚胎表觀遺傳修飾的影響及其對克隆胚胎合子基因激活的影響,同時研究了Scriptaid對水牛轉(zhuǎn)基因效果的影響,以期進(jìn)一步提高水牛體細(xì)胞克隆和轉(zhuǎn)基因克隆的效率。具體的研究結(jié)果如下。1.本研究首先采用醋酸地衣紅染色法確定了水牛卵母細(xì)胞不同成熟培養(yǎng)時間的核相分布情況,然后利用細(xì)胞免疫組化技術(shù)和定量PCR技術(shù)分別分析水牛卵母細(xì)胞組蛋白乙�；揎椀那闆r,并探討Scriptaid對卵母細(xì)胞組蛋白乙�；揎椀挠绊�,從而建立一種檢測水牛卵母細(xì)胞組蛋白乙�；揎椣嚓P(guān)蛋白和基因表達(dá)的技術(shù)方法。結(jié)果顯示：體外成熟培養(yǎng)0h時大約91.8%的卵母細(xì)胞處于... 

【文章來源】：廣西大學(xué)廣西壯族自治區(qū) 211工程院校

【文章頁數(shù)】：121 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 表觀遺傳修飾在哺乳動物卵母細(xì)胞和核移植胚胎中的研究進(jìn)展
    1 核移植技術(shù)的研究進(jìn)展
        1.1 影響動物核移植效率的因素
        1.2 影響核移植效率的分子機(jī)制
    2 組蛋白修飾和DNA甲基化的研究進(jìn)展
        2.1 組蛋白修飾(histone modifications)
        2.2 DNA甲基化(DNA methylation)
    3 提高核移植重編程的方法
        3.1 改變組蛋白乙�；�
        3.2 改變DNA甲基化水平
        3.3 母源向合子型轉(zhuǎn)換
        3.4 蛋白交換
        3.5 蛋白酶體的抑制
    4 組蛋白乙�；揎椩诓溉閯游锫涯讣�(xì)胞成熟過程中的研究
        4.1 組蛋白乙�；揎椩诼涯讣�(xì)胞成熟過程中的變化規(guī)律
        4.2 組蛋白乙�；揎椩诓溉閯游锫涯讣�(xì)胞中的功能調(diào)節(jié)
    5 轉(zhuǎn)基因動物的生產(chǎn)方法
        5.1 原核注射法
        5.2 體細(xì)胞克隆法
        5.3 胚胎干細(xì)胞介導(dǎo)法
        5.4 胞質(zhì)注射法
    6 核移植技術(shù)的應(yīng)用前景
        6.1 拯救瀕危動物
        6.2 胚胎移植前優(yōu)良胚胎選擇成為可能
        6.3 生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因動物
        6.4 研究生殖細(xì)胞表觀修飾的機(jī)制
    7 展望
第二章 水牛卵母細(xì)胞組蛋白乙�；揎椣嚓P(guān)蛋白與基因表達(dá)水平的分析
    摘要
    前言
    1 試驗材料與方法
        1.1 試驗材料
        1.2 試驗方法
        1.3 試驗設(shè)計
        1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析
    2 試驗結(jié)果
        2.1 水牛卵母細(xì)胞在體外成熟過程中核相分布的情況
        2.2 水牛卵母細(xì)胞體外成熟過程中各個時期組蛋白(H3K18)乙�；揎椀淖兓�(guī)律
        2.3 水牛卵母細(xì)胞體外成熟過程中各個時期組蛋白乙�；揎椣嚓P(guān)基因表達(dá)水平的變化情況
    3 分析與討論
    4. 結(jié)論
第三章 Scriptaid處理水牛核移植胚胎對其發(fā)育能力及組蛋白乙�；揎椀挠绊�
    摘要
    前言
    1 試驗材料和方法
        1.1 試驗材料
        1.2 試驗方法
        1.3 試驗設(shè)計
        1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析
    2 試驗結(jié)果
        2.1 不同濃度的Scriptaid對水牛核移植胚胎發(fā)育能力的影響
        2.2 Scriptaid處理不同的時間對水牛核移植胚胎發(fā)育能力的影響
        2.3 Scriptaid處理水牛核移植胚胎對其組蛋白H3K18乙�；揎椀挠绊�
        2.4 Scriptaid處理水牛核移植胚胎對胚胎整體DNA甲基化修飾的影響
        2.5 Scriptaid處理水牛核移植胚胎對胚胎組蛋白乙�；揎椣嚓P(guān)基因表達(dá)的影響
        2.6 Scriptaid處理水牛核移植胚胎對胚胎整體DNA甲基化修飾相關(guān)基因表達(dá)的影響
        2.7 Scriptaid處理水牛核移植胚胎對胚胎發(fā)育相關(guān)基因表達(dá)的影響
    3. 分析與討論
    4 結(jié)論
第四章 Scriptaid對水牛核移植胚胎合子基因激活的影響
    摘要
    前言
    1 試驗材料和方法
        1.1 試驗材料
        1.2 試驗方法
        1.3 試驗設(shè)計
        1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析
    2 試驗結(jié)果
        2.1 水牛體外受精胚胎發(fā)育阻滯時期的確定
        2.2 Scriptaid處理對水牛核移植胚胎核仁超微結(jié)構(gòu)的影響
        2.3 Scriptaid處理水牛核移植胚胎對核蛋白RNA Pol Ⅱ表達(dá)的影響
        2.4 Scriptaid處理水牛核移植重構(gòu)胚對胚胎核仁纖維蛋白表達(dá)的影響
        2.5 Scriptaid對水牛核移植胚胎合子基因啟動的標(biāo)志基因表達(dá)的影響
    3 分析與討論
    4 結(jié)論
第五章 Scriptaid處理水牛轉(zhuǎn)基因供體細(xì)胞及核移植胚胎對其轉(zhuǎn)基因效率的影響
    摘要
    前言
    1 試驗材料與方法
        1.1 試驗材料
        1.2 試驗方法
        1.3 試驗設(shè)計
        1.4 數(shù)據(jù)分析
    2 試驗結(jié)果
        2.1 Scriptaid處理對轉(zhuǎn)PRL基因水牛胎兒成纖維細(xì)胞形態(tài)和GFP蛋白表達(dá)的影響
        2.2 Scriptaid處理對轉(zhuǎn)PRL基因水牛胎兒成纖維細(xì)胞GFP基因表達(dá)水平的影響
        2.3 Scriptaid處理對轉(zhuǎn)PRL基因水牛胎兒成纖維細(xì)胞中GFP-陽性細(xì)胞數(shù)的影響
        2.4 Scriptaid處理對轉(zhuǎn)PRL基因水牛胎兒成纖維細(xì)胞中EF-1A啟動子區(qū)的甲基化狀態(tài)的影響
        2.5 Scriptaid處理對水牛轉(zhuǎn)基因核移植胚胎發(fā)育能力的影響
        2.6 Scriptaid處理對水牛轉(zhuǎn)基因核移植胚胎移植效果的影響
    3 分析與討論
    4 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附件
附圖
英文縮寫-中文對照表
致謝
攻讀博士期間發(fā)表文章


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]TSA促進(jìn)轉(zhuǎn)基因豬體細(xì)胞核移植胚胎發(fā)育和外源基因表達(dá)[J]. 孔慶然,朱江,黃波,郇延軍,王峰,石永乾,劉仲鳳,武美玲,劉忠華.  遺傳. 2011(07)
[2]Delay of ZGA initiation occurred in 2-cell blocked mouse embryos[J]. JIA JING QIU,WU WEN ZHANG,ZHI Li WU,YI HONG WANG,MIN QIAN,YI PING LIInstitute,of Biochemistry and Cell Biology,Shanghai Institutes for Biological Sciences. Chinese Academy of Sciences,200031 Shanghai,ChinaSchool of Life Science,East China Normal University. 200062 Shanghai,China.  Cell Research. 2003(03)
[3]卵丘細(xì)胞對牛卵母細(xì)胞體外成熟和體外受精的影響[J]. 楊膺白,盧克煥.  廣西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報. 1994(01)

博士論文
[1]卵母細(xì)胞體外成熟及人胚胎玻璃化冷凍的研究[D]. 馮貴雪.廣西大學(xué) 2006

碩士論文
[1]水牛供體細(xì)胞組蛋白乙�；c核移植胚胎發(fā)育能力相關(guān)性的研究[D]. 羅嬋.廣西大學(xué) 2007



本文編號：3559732