腸道腺病毒主要誘發(fā)嬰幼兒急性痢疾，是如今誘發(fā)導(dǎo)致嬰幼兒病毒性腹瀉的僅次于輪狀病毒的病原體。如腺病毒40和41型腺病毒，該病毒被確認為主要因素依然引起小兒腹瀉。因此針對該病毒進行快速、靈敏的檢測方法是預(yù)防該疾病的和控制該病的關(guān)鍵所在，本研究制備了抗腺病毒五鄰體單克隆抗體，并對其生物特性進行了研究分析和鑒定，創(chuàng)立了雙抗夾心ELISA方法，為該病毒的檢測及防控供給了有用的檢測措施。具體研究情況如下：抗腺病毒五鄰體單克隆抗體的制備及鑒定：采用基因工程表達抗原所表達的腺病毒五鄰體作為抗原對BALB/c小鼠進行免疫，三后免疫小鼠脾淋巴細胞和骨髓瘤細胞融合，并以腺病毒五鄰體蛋白為篩選抗原對融合后的雜交瘤細胞進行間接ELISA篩選。獲得了5株穩(wěn)定分泌抗腺病毒五鄰體單抗的細胞株，標(biāo)記為3C4、4C4、4D7、4F2和4H3。4D7免疫球蛋白亞類為IgG2a，其余4株為IgG1。對5株細胞連續(xù)3個月體外傳代實驗和小鼠腹水連續(xù)傳代實驗，5株細胞都能持續(xù)穩(wěn)定分泌單克隆抗體，上清及小鼠腹腔腹水效價在細胞培養(yǎng)中的間接ELISA，細胞培養(yǎng)上清中穩(wěn)定在2000左右，小鼠腹腔腹水效價穩(wěn)定維持在200000以上，且與引發(fā)... 

【文章來源】：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)甘肅省

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
SUMMARY
英漢對照表
前言
第一章 文獻綜述
    1. 腺病毒的基本特征
        1.1 病毒的分類
        1.2 病毒的結(jié)構(gòu)和功能
        1.3 腺病毒的受體
        1.4 病毒的轉(zhuǎn)錄和復(fù)制
    2. 腺病毒的感染與致病性
        2.1 腺病毒的感染
        2.2 流行病學(xué)
        2.3 致病機理
        2.4 臨床表現(xiàn)
    3. 腺病毒的檢測方法
        3.1 細胞培養(yǎng)
        3.2 電鏡
        3.3 抗原檢測
        3.4 組織病理學(xué)
        3.5 核酸測定
    4. 抗腺病毒治療
        4.1 合成類藥物抗腺病毒
        4.2 中藥抗腺病毒
        4.3 抗腺病毒單克隆抗體
    5. 單克隆抗體研究進展
        5.1 傳統(tǒng)的雜交瘤技術(shù)
        5.2 單克隆抗體制備技術(shù)的最新進展
        5.3 單克隆抗體的應(yīng)用
        5.4 展望
第二章 抗腺病毒五鄰體單克隆抗體的制備及鑒定
    1. 材料
        1.1 菌株、腺病毒五鄰體抗原、細胞及實驗動物
        1.2 主要儀器設(shè)備
        1.3 主要試劑
        1.4 試劑配制
    2. 實驗方法
        2.1 免疫動物
        2.2 抗體篩選間接ELISA檢測方法的建立
        2.3 細胞融合
        2.4 陽性雜交瘤細胞株的篩選與克隆
        2.5 單克隆抗體制備
        2.6 單克隆抗體的純化
        2.7 單克隆抗體生物學(xué)特性鑒定
    3. 結(jié)果
        3.1 單克隆抗體篩選間接ELISA方法的建立
        3.2 細胞融合及其雜交瘤細胞株的建立
        3.3 單抗的純化
        3.4 單克隆抗體的SDS-PAGE鑒定結(jié)果
        3.5 單克隆抗體生物學(xué)特性鑒定結(jié)果
        3.6 單克隆抗體亞類測定
        3.7 抗原識別位點分析
        3.8 穩(wěn)定性分析
        3.9 雜交瘤細胞染色體計數(shù)
    4. 討論
第三章 腺病毒五鄰體雙抗體夾心ELISA檢測方法的建立
    1. 材料
        1.1 主要試劑及其配制
        1.2 主要儀器及其設(shè)備
    2. 實驗方法
        2.1 單克隆抗體的濃縮
        2.2 酶標(biāo)抗體的制備
        2.3 雙抗夾心法建立
        2.4 雙抗夾心法特異性鑒定
    3. 實驗結(jié)果
        3.1 捕獲抗體及酶標(biāo)抗體最適工作濃度的確定
        3.2 雙抗夾心法特異性鑒定
    4. 討論
第四章 結(jié)論
參考文獻
個人簡介
在研期間發(fā)表論文
導(dǎo)師簡介
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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[2]免疫組織化學(xué)技術(shù)常見問題分析及改進措施[J]. 徐彤.  中外醫(yī)學(xué)研究. 2013(18)
[3]黃芪甲苷體外抗腺病毒作用研究[J]. 商蕾,曲章義,寧莉莉,王迎晨,魏鳳香,高虹,魯偉君.  中國藥理學(xué)通報. 2013(06)
[4]80例成人腺病毒B組55型感染臨床分析[J]. 謝楊新,涂波,陳威巍,周志平,聶為民,王傳力,秦恩強,李文剛,趙敏.  傳染病信息. 2013(01)
[5]單克隆抗體制備技術(shù)的改進[J]. 李麗英.  內(nèi)江科技. 2013(02)
[6]McAb制備及其表達系統(tǒng)的研究進展[J]. 劉瀛,湯仁仙,付琳琳,孔德龍.  醫(yī)學(xué)綜述. 2013(01)
[7]穿心蓮內(nèi)酯磺化物體外抗腺病毒藥效學(xué)研究[J]. 平靜,王思源,謝寧,陳曉,王雪峰.  中國實驗方劑學(xué)雜志. 2012(21)
[8]中藥及其活性成分抗腺病毒研究進展[J]. 商蕾,曲章義,魏鳳香,魯偉君.  中草藥. 2012(10)
[9]南京地區(qū)2010～2011年度呼吸道感染患兒腺病毒的流行病學(xué)研究[J]. 高小倩,金玉,謝志萍,高寒春,謝樂云,張健,段招軍.  病毒學(xué)報. 2012(05)
[10]哈爾濱地區(qū)住院患者呼吸道病毒感染的病原學(xué)研究[J]. 黃冬娟,孫穎,齊桂云,唐艷紅,王瑞琨,郭薇媛,曲章義.  哈爾濱醫(yī)科大學(xué)學(xué)報. 2012(02)



本文編號：3558728