奶水牛子宮內(nèi)膜炎是奶水牛產(chǎn)后由病原微生物感染引起的一種常見繁殖疾病,常造成受胎率的下降和產(chǎn)犢間隔時期的延長,給奶水牛養(yǎng)殖業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟損失。細(xì)菌感染是引起奶水牛子宮內(nèi)膜炎的主要病原微生物之一,對于產(chǎn)后奶水牛子宮內(nèi)細(xì)菌組成的研究將為臨床上奶水牛子宮內(nèi)膜炎的防治提供相關(guān)的理論依據(jù)。本論文研究了產(chǎn)后14d健康和患子宮內(nèi)膜炎奶水牛子宮內(nèi)細(xì)菌組成的差異。首先通過實際操作對比研究了3種從奶水牛子宮內(nèi)采集粘液的方法；其次對比研究了三種從子宮沖洗液中提取微生物總DNA的方法；最后分別建立了健康和患子宮內(nèi)膜炎水牛子宮內(nèi)細(xì)菌的克隆文庫,并對子宮內(nèi)的細(xì)菌進(jìn)行了序列比對和系統(tǒng)發(fā)育分析。試驗結(jié)果如下：1.使用子宮沖洗槍配套噴壺的采樣方法適合采集水牛子宮內(nèi)的粘液,該方法操作簡單、對器械要求較低并且采集的樣品具有代表性。2.使用QIAamp DNA stool mini kit和Bead beating結(jié)合的方法適合提取子宮沖洗液中微生物總DNA,該方法的DNA濃度可達(dá)1000ng/ul,純度高,并且片段完整性較好,通過PCR檢測,所提取的DNA適合進(jìn)一步的分子生物學(xué)研究。3.產(chǎn)后14天水牛子宮內(nèi)的細(xì)菌主要屬于... 

【文章來源】：廣西大學(xué)廣西壯族自治區(qū) 211工程院校

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
英文縮略符號
第一章 文獻(xiàn)綜述 奶牛子宮內(nèi)膜炎以及生殖道微生態(tài)的研究進(jìn)展
    1. 奶牛子宮內(nèi)膜炎的病因
        1.1 奶牛自身因素
            1.1.1 營養(yǎng)因素
            1.1.2 激素水平
            1.1.3 繼發(fā)性因素
            1.1.4 操作管理不當(dāng)
        1.2 外界因素
            1.2.1 細(xì)菌
            1.2.2 其他病原微生物
    2 子宮內(nèi)膜炎的危害
        2.1 子宮內(nèi)膜炎對精子存活和功能的影響
        2.2 子宮內(nèi)膜炎對卵巢功能、卵泡發(fā)育和排卵作用的影響
    3 奶牛子宮內(nèi)膜炎的診斷方法
        3.1 直腸觸診
        3.2 子宮內(nèi)膜活檢
        3.3 細(xì)胞學(xué)檢查
    4 奶牛子宮內(nèi)膜炎治療方法
        4.1 抗生素治療
        4.2 激素治療
        4.3 中草藥治療
        4.4 微生態(tài)治療
    5 分子生物學(xué)技術(shù)在生殖道微生態(tài)方面的研究進(jìn)展
    研究目的和意義
第二章 水牛子宮沖洗液DNA提取方法的比較研究
    1 材料和方法
        1.1 試驗動物
        1.2 主要儀器及藥品
        1.3 樣品采集
        1.4 DNA提取方法
            1.4.1 方法一(QIAamp DNA stool mini kit)
            1.4.2 方法二(QIAamp DNA stool mini kit+溶菌酶)
            1.4.3 方法三(QIAamp DNA stool mini kit+Bead beating)
        1.5 DNA濃度的測定和電泳檢測
        1.6 PCR檢測
    2 結(jié)果與分析
        2.1 DNA純度及濃度的檢測結(jié)果
        2.2 DNA電泳檢測
        2.3 PCR檢測
    3 討論
        3.1 采樣方法
        3.2 DNA提取方法
第三章 健康與患子宮內(nèi)膜炎水牛子宮內(nèi)細(xì)菌組成的比較分析
    1 材料和方法
        1.1 試驗水牛日糧水平及飼養(yǎng)管理
        1.2 水牛產(chǎn)后子宮沖洗液的采集
        1.3 主要儀器和試劑
        1.4 子宮內(nèi)膜炎的判定
        1.5 子宮沖洗液DNA的提取
        1.6 DNA的純化
        1.7 PCR
        1.8 PCR產(chǎn)物的切膠回收
        1.9 水牛產(chǎn)后子宮內(nèi)細(xì)菌16S rRNA基因克隆文庫的構(gòu)建
    2 序列分析及進(jìn)化樹的構(gòu)建
    3 結(jié)果與分析
        3.1 子宮內(nèi)膜炎的判段結(jié)果(見表3-2,圖3-5)
        3.2 產(chǎn)后水牛子宮內(nèi)細(xì)菌16S rDNA基因序列分析
        3.3 產(chǎn)后水牛子宮內(nèi)細(xì)菌16S rRNA克隆序列的系統(tǒng)發(fā)育分析
    4 討論
總結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡介
在讀期間發(fā)表論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]錫林浩特市周邊地區(qū)奶牛子宮內(nèi)膜炎病原菌的分離鑒定[J]. 李潤元,娜日蘇,迎春,何雯娟.  黑龍江畜牧獸醫(yī). 2012(23)
[2]復(fù)方中草藥防治奶牛子宮內(nèi)膜炎的效果[J]. 何光中,劉鏡,楊紅文,何金平.  安徽農(nóng)業(yè)科學(xué). 2011(25)
[3]奶水牛子宮內(nèi)膜炎細(xì)菌的分離鑒定及藥敏試驗分析[J]. 高玉梅,何寶祥,覃廣勝,楊憲苓,鄭威.  中國奶牛. 2010(06)
[4]奶牛子宮炎的臨床分析[J]. 肖定漢,李蘭華,張興全,陳寶興.  中國奶牛. 1999(06)
[5]子宮內(nèi)膜炎和卵巢機能不全患牛血清中銅含量變化及其影響因素[J]. 玉之磊,潘興廣,胡春山.  黑龍江畜牧獸醫(yī). 1998(01)

碩士論文
[1]細(xì)菌性陰道病菌群的16S rDNA微生態(tài)分析[D]. 劉雅娟.南方醫(yī)科大學(xué) 2012
[2]體外培養(yǎng)和分子生物學(xué)技術(shù)研究奶牛產(chǎn)后子宮內(nèi)菌群的動態(tài)變化[D]. 彭宇.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
[3]北京地區(qū)奶牛子宮內(nèi)膜炎致病菌的分離鑒定及抑菌試驗[D]. 張祎娜.河北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
[4]奶牛子宮內(nèi)膜炎致病菌的16S rRNA序列鑒定及金黃色葡萄球菌血漿凝固酶的原核表達(dá)[D]. 張洪波.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2009



本文編號：3555151