副豬嗜血桿菌（Haemophilus parasuis, HPS）感染引發(fā)豬副豬嗜血桿菌病,高發(fā)病率和高死亡率使其成為全球范圍內(nèi)危害養(yǎng)豬業(yè)的主要病菌之一。截至目前為止,我們對(duì)其發(fā)病分子機(jī)制及宿主應(yīng)答機(jī)理認(rèn)識(shí)仍不夠清晰。本實(shí)驗(yàn)室前期對(duì)感染HPS的豬脾臟進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測(cè)序,發(fā)現(xiàn)豬S100A8, S100A9和S100A12基因表達(dá)顯著上調(diào),用LPS及poly I:C模擬細(xì)菌及病毒刺激均能有效引起上述基因的上調(diào)表達(dá),并且呈現(xiàn)相同的表達(dá)規(guī)律。為了揭示這幾個(gè)基因的功能,本研究選取豬S100A12基因,對(duì)其轉(zhuǎn)錄調(diào)控及信號(hào)通路進(jìn)行功能研究。取得了以下結(jié)果：1.運(yùn)用雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)對(duì)豬S100A12的轉(zhuǎn)錄調(diào)控進(jìn)行研究,結(jié)果表明豬S100A12基因受轉(zhuǎn)錄因子Sox-5負(fù)調(diào)控。2. RT-PCR方法檢測(cè)豬S100A8、S100A9、S100A12和RAGE基因在成年長(zhǎng)白豬7個(gè)組織及兩個(gè)豬源細(xì)胞系的表達(dá)情況,結(jié)果表明豬S100A8, S100A9和S100A12基因在脾臟、肺臟中高表達(dá),并且三者呈現(xiàn)一致的表達(dá)模式；豬RAGE基因僅在肺組織中高表達(dá)。3.在PK-15細(xì)胞中S100A12不能通過(guò)RAGE信號(hào)通路激... 

【文章來(lái)源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞表
1 前言
    1.1 研究問(wèn)題的由來(lái)
    1.2 文獻(xiàn)綜述
        1.2.1 炎癥因子
        1.2.2 S100蛋白家族研究進(jìn)展
        1.2.3 RAGE蛋白研究進(jìn)展
        1.2.4 S100/RAGE/NF-κB信號(hào)通路
    1.3 本研究的目的與意義
2 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 樣品與細(xì)胞
        2.1.2 載體和菌株
        2.1.3 試劑與試劑盒
        2.1.4 主要儀器設(shè)備
        2.1.5 主要分子生物學(xué)軟件、網(wǎng)站和數(shù)據(jù)庫(kù)
    2.2 方法
        2.2.1 本研究的技術(shù)路線
        2.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.3 雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)
        2.2.4 組織表達(dá)譜與基因過(guò)表達(dá)效果定量分析
        2.2.5 激光共聚膠顯微鏡觀察BIFC蛋白互作
        2.2.6 倒置熒光顯微鏡觀察SCT+SNT蛋白互作
3 結(jié)果
    3.1 Sox-5負(fù)調(diào)控豬S1OOA12基因
    3.2 豬S100A8、S100A9、S100A12和RAGE基因組織表達(dá)譜及在PK-15細(xì)胞過(guò)表達(dá)效果檢測(cè)
        3.2.1 豬S100A8、S100A9、S100A12和RAGE基因組織表達(dá)譜
        3.2.2 豬S100A8、S100A9、S100A12及RAGE基因在PK-15細(xì)胞中過(guò)表達(dá)效果檢測(cè)
    3.3 利用雙熒光素酶報(bào)告載體pNFκB-luc檢測(cè)NF-κB活性
        3.3.1 豬源細(xì)胞系PK-15
        3.3.2 鼠源細(xì)胞系C2C12
    3.4 BIFC檢測(cè)RAGE下游互作蛋白
        3.4.1 RAGE下游候選互作蛋白
        3.4.2 BIFC融合載體的構(gòu)建
        3.4.3 共聚焦激光掃描顯微鏡
        3.4.4 BIFC技術(shù)后續(xù)研究—SCT+SNT系統(tǒng)
4 討論
    4.1 關(guān)于Sox-5負(fù)調(diào)控S100A12基因表達(dá)的討論
    4.2 關(guān)于影響S100/RAGE/NF-κB信號(hào)通路的因素
        4.2.1 細(xì)胞類(lèi)型與細(xì)胞密度
        4.2.2 TLR4受體
        4.2.3 RAGE蛋白配體間作用
        4.2.4 其他有機(jī)物調(diào)節(jié)
    4.3 關(guān)于RAGE下游互作蛋白討論
        4.3.1 NCK1
        4.3.2 GrB2
        4.3.3 RHOA
    4.4 蛋白互作技術(shù)討論
5 小結(jié)
    5.1 本研究的主要結(jié)論
    5.2 本研究的特色與創(chuàng)新點(diǎn)
    5.3 本研究的不足與進(jìn)一步工作的建議
參考文獻(xiàn)
附錄
攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文
致謝



本文編號(hào)：3551821