副豬嗜血桿菌（Haemophilus parasuis, HPS）感染引發(fā)豬副豬嗜血桿菌病,高發(fā)病率和高死亡率使其成為全球范圍內(nèi)危害養(yǎng)豬業(yè)的主要病菌之一。截至目前為止,我們對其發(fā)病分子機制及宿主應答機理認識仍不夠清晰。本實驗室前期對感染HPS的豬脾臟進行轉(zhuǎn)錄組測序,發(fā)現(xiàn)豬S100A8, S100A9和S100A12基因表達顯著上調(diào),用LPS及poly I:C模擬細菌及病毒刺激均能有效引起上述基因的上調(diào)表達,并且呈現(xiàn)相同的表達規(guī)律。為了揭示這幾個基因的功能,本研究選取豬S100A12基因,對其轉(zhuǎn)錄調(diào)控及信號通路進行功能研究。取得了以下結(jié)果：1.運用雙熒光素酶報告系統(tǒng)對豬S100A12的轉(zhuǎn)錄調(diào)控進行研究,結(jié)果表明豬S100A12基因受轉(zhuǎn)錄因子Sox-5負調(diào)控。2. RT-PCR方法檢測豬S100A8、S100A9、S100A12和RAGE基因在成年長白豬7個組織及兩個豬源細胞系的表達情況,結(jié)果表明豬S100A8, S100A9和S100A12基因在脾臟、肺臟中高表達,并且三者呈現(xiàn)一致的表達模式；豬RAGE基因僅在肺組織中高表達。3.在PK-15細胞中S100A12不能通過RAGE信號通路激... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：76 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞表
1 前言
    1.1 研究問題的由來
    1.2 文獻綜述
        1.2.1 炎癥因子
        1.2.2 S100蛋白家族研究進展
        1.2.3 RAGE蛋白研究進展
        1.2.4 S100/RAGE/NF-κB信號通路
    1.3 本研究的目的與意義
2 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 樣品與細胞
        2.1.2 載體和菌株
        2.1.3 試劑與試劑盒
        2.1.4 主要儀器設(shè)備
        2.1.5 主要分子生物學軟件、網(wǎng)站和數(shù)據(jù)庫
    2.2 方法
        2.2.1 本研究的技術(shù)路線
        2.2.2 細胞培養(yǎng)
        2.2.3 雙熒光素酶報告基因檢測
        2.2.4 組織表達譜與基因過表達效果定量分析
        2.2.5 激光共聚膠顯微鏡觀察BIFC蛋白互作
        2.2.6 倒置熒光顯微鏡觀察SCT+SNT蛋白互作
3 結(jié)果
    3.1 Sox-5負調(diào)控豬S1OOA12基因
    3.2 豬S100A8、S100A9、S100A12和RAGE基因組織表達譜及在PK-15細胞過表達效果檢測
        3.2.1 豬S100A8、S100A9、S100A12和RAGE基因組織表達譜
        3.2.2 豬S100A8、S100A9、S100A12及RAGE基因在PK-15細胞中過表達效果檢測
    3.3 利用雙熒光素酶報告載體pNFκB-luc檢測NF-κB活性
        3.3.1 豬源細胞系PK-15
        3.3.2 鼠源細胞系C2C12
    3.4 BIFC檢測RAGE下游互作蛋白
        3.4.1 RAGE下游候選互作蛋白
        3.4.2 BIFC融合載體的構(gòu)建
        3.4.3 共聚焦激光掃描顯微鏡
        3.4.4 BIFC技術(shù)后續(xù)研究—SCT+SNT系統(tǒng)
4 討論
    4.1 關(guān)于Sox-5負調(diào)控S100A12基因表達的討論
    4.2 關(guān)于影響S100/RAGE/NF-κB信號通路的因素
        4.2.1 細胞類型與細胞密度
        4.2.2 TLR4受體
        4.2.3 RAGE蛋白配體間作用
        4.2.4 其他有機物調(diào)節(jié)
    4.3 關(guān)于RAGE下游互作蛋白討論
        4.3.1 NCK1
        4.3.2 GrB2
        4.3.3 RHOA
    4.4 蛋白互作技術(shù)討論
5 小結(jié)
    5.1 本研究的主要結(jié)論
    5.2 本研究的特色與創(chuàng)新點
    5.3 本研究的不足與進一步工作的建議
參考文獻
附錄
攻讀學位期間發(fā)表論文
致謝



本文編號：3551821