鴨病毒性腸炎（Duck Viral Enteritis，DVE），又名鴨瘟（Duck Plague，DP），是由鴨腸炎病毒（Duck enteritis virus，DEV）引起的常見于鴨、鵝和其他雁形目禽類的一種急性、熱性、敗血性、高度接觸性傳染病。主要特征是損傷血管、引起消化道黏膜出血壞死、淋巴器官和實(shí)質(zhì)性臟器出現(xiàn)退行性病變。發(fā)病率和死亡率都很高，給養(yǎng)鴨業(yè)帶來了巨大損失。目前預(yù)防和控制DVE的主要措施是疫苗免疫，而研究病毒在動(dòng)物機(jī)體中的分布與增殖規(guī)律是闡明病毒致病機(jī)理和免疫機(jī)理的重要基礎(chǔ)，因此有必要建立分子生物學(xué)方法研究DEV強(qiáng)毒和弱毒在感染鴨體內(nèi)的動(dòng)態(tài)分布規(guī)律，以闡明DEV強(qiáng)毒的致病機(jī)理，同時(shí)為進(jìn)一步合理、有效利用疫苗預(yù)防鴨瘟提供依據(jù)。本試驗(yàn)根據(jù)DEV CSC強(qiáng)毒株及其傳代致弱毒株DEV p80的基因序列差異，建立了檢測(cè)鴨瘟強(qiáng)、弱毒通用型和鴨瘟強(qiáng)、弱毒鑒別型兩種SYBR GreenⅠ實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法。結(jié)果顯示，兩種方法建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線均具有良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)均為1.0，熔解曲線分析均為特異性單峰，Tm分別為80.5±0℃、81.5±0℃，并且與正常鴨組織以及其他禽源病毒... 

【文章來源】：中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所北京市

【文章頁數(shù)】：74 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞表
第一章 引言
    1.1 鴨病毒性腸炎研究進(jìn)展
        1.1.1 歷史
        1.1.2 病原學(xué)
        1.1.3 流行病學(xué)
        1.1.4 分子生物學(xué)進(jìn)展
        1.1.5 診斷方法
        1.1.6 疫苗預(yù)防
    1.2 熒光定量 PCR 研究進(jìn)展
        1.2.1 實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 技術(shù)簡(jiǎn)介
        1.2.2 實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 的分類
        1.2.3 實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 的幾個(gè)重要概念
        1.2.4 SYBR Green 實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 原理
        1.2.5 在動(dòng)物傳染病診斷上的應(yīng)用
    1.3 技術(shù)路線
    1.4 本研究目的與意義
第二章 鴨腸炎病毒 SYBR GreenⅠ實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 檢測(cè)方法的建立
    摘要
    2.1 試驗(yàn)材料
        2.1.1 病毒和菌株
        2.1.2 試驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.3 主要試劑
        2.1.4 主要試劑配制方法
        2.1.5 主要儀器設(shè)備
        2.1.6 試驗(yàn)用材料
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 病毒繁殖
        2.2.2 引物設(shè)計(jì)
        2.2.3 模板制備
        2.2.4 標(biāo)準(zhǔn)品的制備
        2.2.5 熒光定量引物的設(shè)計(jì)與合成
        2.2.6 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
        2.2.7 特異性試驗(yàn)
        2.2.8 重復(fù)性試驗(yàn)
        2.2.9 敏感性試驗(yàn)
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 gD 基因 PCR 擴(kuò)增結(jié)果
        2.3.2 gI 基因 PCR 擴(kuò)增結(jié)果
        2.3.3 標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒 pMD18T-gD 鑒定結(jié)果
        2.3.4 標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒 pMD18T-gI 鑒定結(jié)果
        2.3.5 標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒 pMD18T-gD、pMD18T-gI 的測(cè)序結(jié)果
        2.3.6 熒光定量引物的驗(yàn)證
        2.3.7 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
        2.3.8 特異性實(shí)驗(yàn)
        2.3.9 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)
        2.3.10 敏感性實(shí)驗(yàn)
    2.4 討論
    2.5 結(jié)論
第三章 DEV 強(qiáng)、弱毒在感染鴨體內(nèi)的動(dòng)態(tài)分布研究
    摘要
    3.1 試驗(yàn)材料
        3.1.1 毒株
        3.1.2 試驗(yàn)動(dòng)物
        3.1.3 主要試劑
        3.1.4 主要試劑配制方法
        3.1.5 主要儀器
        3.1.6 試驗(yàn)用材料
    3.2 試驗(yàn)方法
        3.2.1 試驗(yàn)動(dòng)物處理
        3.2.2 樣品采集及處理方法
        3.2.3 樣品 DNA 的提取
        3.2.4 樣品 DNA 檢測(cè)
        3.2.5 試驗(yàn)結(jié)果的數(shù)據(jù)分析
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 DEV 強(qiáng)毒 CSC 株在接種鴨體內(nèi)的動(dòng)態(tài)分布
        3.3.2 DEV 弱毒 p80 株在免疫鴨體內(nèi)的動(dòng)態(tài)分布
    3.4 討論
        3.4.1 關(guān)于 DEV 強(qiáng)毒 CSC 株在感染鴨體內(nèi)的動(dòng)態(tài)分布和增殖規(guī)律
        3.4.2 關(guān)于 DEV 弱毒 p80 株在免疫鴨體內(nèi)的動(dòng)態(tài)分布和增殖規(guī)律
    3.5 結(jié)論
第四章 DEV 強(qiáng)毒 CSC 株在 p80 株免疫鴨泄殖腔排毒規(guī)律的研究
    摘要
    4.1 試驗(yàn)材料
        4.1.1 毒株
        4.1.2 試驗(yàn)動(dòng)物
        4.1.3 主要試劑
        4.1.4 主要試劑配制方法
        4.1.5 主要儀器
        4.1.6 試驗(yàn)用材料
    4.2 試驗(yàn)方法
        4.2.1 試驗(yàn)動(dòng)物處理
        4.2.2 樣品采集及處理方法
        4.2.3 樣品 DNA 的提取
        4.2.4 樣品 DNA 的檢測(cè)
        4.2.5 試驗(yàn)結(jié)果的數(shù)據(jù)分析
    4.3 結(jié)果
        4.3.1 DEVp80 弱毒免疫鴨攻毒 14 d 后死亡情況
        4.3.2 泄殖腔排毒情況
    4.4 討論
        4.4.1 DEVp80 弱毒免疫鴨攻毒 14 d 后死亡情況
        4.4.2 DEVp80 弱毒免疫鴨攻毒后排毒量檢測(cè)
    4.5 結(jié)論
第五章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
附錄
作者簡(jiǎn)歷


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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本文編號(hào)：3551805