鹿茸為雄鹿的第二性征,是鹿進(jìn)入青春期后在額骨頂部長(zhǎng)出的包括血管、皮層、軟骨等多個(gè)組織形成的器官。梅花鹿鹿茸是哺乳動(dòng)物中唯一可完全再生的骨質(zhì)器官,有著其它動(dòng)物不可比擬的生長(zhǎng)速度和超強(qiáng)的穩(wěn)定性,是研究器官再生和創(chuàng)傷修復(fù)的理想模型。鹿茸經(jīng)過特殊的骨形成方式完成周期性的再生,這個(gè)過程是由多種因素共同作用的結(jié)果。轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子（Transforming growth factor,TGF）廣泛分布于成纖維及上皮細(xì)胞內(nèi)。研究表明TGF-β2存在于鹿茸頂端組織中,可與Wnt信號(hào)通路協(xié)同促進(jìn)上皮細(xì)胞向間充質(zhì)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化,并使細(xì)胞維持在間充質(zhì)狀態(tài)。而鹿茸頂端軟骨組織形成的最初階段源于間充質(zhì)的快速生長(zhǎng)。故TGF-β對(duì)鹿茸軟骨快速生長(zhǎng)階段的調(diào)控機(jī)理需要進(jìn)一步的研究。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用PCR技術(shù)克隆獲得梅花鹿TGF-β2基因編碼區(qū)全長(zhǎng)cDNA序列,將其純化回收并構(gòu)建重組質(zhì)粒pMD-18T-TGF-β2,轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5a中后進(jìn)行PCR及雙酶切鑒定,最后進(jìn)行核苷酸序列測(cè)定。應(yīng)用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)TGF-β2在梅花鹿鹿茸頂端不同組織的表達(dá)。應(yīng)用Trizol試劑法提取鹿茸頂端軟骨及間充質(zhì)細(xì)胞總RNA,并進(jìn)行HiSeq深度測(cè)序... 

【文章來源】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)吉林省

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

TGF-β信號(hào)通路圖

%的血清進(jìn)行封閉，37℃孵，室溫孵育 20min，PBS 沖育 20 min，PBS 沖洗三次，in，顯微鏡下觀測(cè)結(jié)果。滌過后，將切片放于 1%鹽酸90%、95%、無水乙醇中， Olympus 對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析。提取法得到梅花鹿鹿茸頂端組織中可以看出，所得到的總 現(xiàn)象。

圖 2-2 TGF-β2 基因 PCR 擴(kuò)增NA Marker（DL2000）；1.PCR.2-2 PCR amplification of TGF-β2 DNA Marker (DL2000);1. PCR pTGF-β2 的 PCR 鑒定與雙酶切為模板，進(jìn)行 PCR 反應(yīng)，P現(xiàn)目的條帶。結(jié)果如圖 2-3β2，同樣于 1245bp 處出現(xiàn)目1245bp2000bp1000bp750bp500bp

【參考文獻(xiàn)】：
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碩士論文
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本文編號(hào)：3546976