發(fā)布時(shí)間：2021-12-16 23:58

　　捻轉(zhuǎn)血矛線蟲（Haemonchus contortus）是綿羊（Ovis aries）、山羊（Capra hircus）等反芻動(dòng)物重要的寄生蟲之一,可造成養(yǎng)殖業(yè)的巨大經(jīng)濟(jì)損失�；谵D(zhuǎn)錄組研究,本課題組前期從捻轉(zhuǎn)血矛線蟲耐藥蟲株中鑒定獲得耐藥基因—ABC （ATP-binding cassette）轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因（GenBank No. MT478136）。本研究擬分析ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因的生物信息學(xué)特征,建立ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的可溶性誘導(dǎo)表達(dá)及純化體系,為進(jìn)一步探究ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白參與的耐藥機(jī)制提供參考依據(jù)。首先利用在線軟件對(duì)ABC進(jìn)行蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)分析及抗原表位預(yù)測(cè),結(jié)果顯示,ABC分子式為C₉₂₈H₁₅₀₂N₂₇₀O₂₆₅S₇,屬于不含跨膜區(qū)和信號(hào)肽的親水性蛋白質(zhì),二級(jí)結(jié)構(gòu)主要以延伸鏈為主;ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的抗原性較高,含有較多的抗原表位。利用反轉(zhuǎn)錄PCR （reverse transcription PCR, RT-PCR）擴(kuò)增ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因,經(jīng)酶切連接構(gòu)建重組質(zhì)粒pET30a（+）... 

【文章來源】：農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào). 2020,28(10)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

不同誘導(dǎo)溫度條件下ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白原核表達(dá)的SDS-PAGE檢測(cè)

ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因PCR擴(kuò)增(A)及重組質(zhì)粒酶切鑒定(B和C)

ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白是真核生物體內(nèi)產(chǎn)生耐藥性的重要原因之一。大量研究發(fā)現(xiàn)，ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白在介導(dǎo)細(xì)菌耐藥、昆蟲耐藥及腫瘤耐藥中發(fā)揮重要作用。Kesavan等(2020)對(duì)新型四環(huán)素—依拉環(huán)素(eravacycline)誘導(dǎo)鮑曼不動(dòng)桿菌(Acinetobacter baumannii)進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組和蛋白組學(xué)分析，結(jié)果顯示，ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白為響應(yīng)藥物選擇壓力，在誘導(dǎo)耐藥株中顯著高表達(dá)。Dooley等(2015)利用馬來絲蟲(Brugia malayi)伊維菌素耐藥蟲株模型，通過體內(nèi)和體外平行實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，宿主ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白在線蟲耐藥性中起到關(guān)鍵的作用。Raza等(2016)對(duì)捻轉(zhuǎn)血矛線蟲伊維菌素耐藥蟲株和敏感蟲株進(jìn)行ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白表達(dá)模式分析，發(fā)現(xiàn)ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白在耐藥蟲株中的表達(dá)量較敏感蟲株高12.6倍。研究人員回顧了過去10年ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白介導(dǎo)腫瘤多藥耐藥的調(diào)節(jié)，結(jié)果顯示，ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白介導(dǎo)的外排泵系統(tǒng)導(dǎo)致腫瘤化學(xué)治療失敗及多藥耐藥的產(chǎn)生(Chen et al.,2016)。最近有研究人員利用低溫電子顯微鏡解析ABC蛋白結(jié)構(gòu)，揭示了ABC轉(zhuǎn)運(yùn)體介導(dǎo)細(xì)胞耐藥性的機(jī)制(Hofmann et al.,2019)。這些研究表明ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白在耐藥性中發(fā)揮一定的作用。圖4 不同IPTG誘導(dǎo)濃度條件下ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白原核表達(dá)的SDS-PAGE檢測(cè)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]捻轉(zhuǎn)血矛線蟲GST耐藥基因的克隆、表達(dá)及生物信息學(xué)分析[J]. 趙學(xué)亮,孫柯,蘇倩,呼和巴特爾,王文龍.  中國農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2020(01)
[2]綿羊捻轉(zhuǎn)血矛線蟲流行病學(xué)調(diào)查及耐藥性檢測(cè)[J]. 趙學(xué)亮,額葉勒德格,海鷹,米其德,孫柯,呂旭,王文龍.  家畜生態(tài)學(xué)報(bào). 2019(11)
[3]捻轉(zhuǎn)血矛線蟲阿苯達(dá)唑敏感株和耐藥株比較轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析[J]. 趙學(xué)亮,王姝懿,孫柯,蘇倩,王文龍,劉春霞.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2019(09)



本文編號(hào)：3539040