GATA家族是能與核酸共同序列（A/T）GATA（A/G）相結(jié)合的轉(zhuǎn)錄因子,包括6個成員,即GATA-1,-2,-3,-4,-5,-6.目前研究表明,GATA家族中只有GATA-4和GATA-6在卵巢中共表達,GATA-4與人、小鼠、豬等的卵巢顆粒細胞增殖、分化、凋亡以及卵泡閉鎖等關系密切；但有關GATA-6在卵巢中的功能還未知。目前有關探討GATA-4和GATA-6在鵝卵巢功能的研究還未報道。本文以天府肉鵝母系為試驗材料,從分子水平研究了鵝GATA-4和GATA-6基因的結(jié)構(gòu)差異性,并檢測GATA-4和GATA-6 mRNA在三種不同類型的卵泡以及不同等級卵泡中的表達量,探討GATA-4和GATA-6在卵泡發(fā)育中的作用；其次通過構(gòu)建GATA-4真核表達載體,培養(yǎng)鵝顆粒細胞,分析過表達GATA-4基因后,對下游靶基因、類固醇合成、顆粒細胞增殖的影響,初步探討GATA-4在鵝卵泡顆粒細胞中的作用；最后通過藥物25-羥基膽固醇（25-hydroxycholesterol）構(gòu)建顆粒細胞凋亡模型,分析誘導凋亡后,過表GATA-4抵制藥物對可顆粒細胞凋亡的能力,和平衡藥物抑制顆粒細胞生成類固醇的... 

【文章來源】：四川農(nóng)業(yè)大學四川省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
常用詞語英文縮寫
前言
1 文獻綜述
    1.1 GATA家族簡介
    1.2 GATA家族在內(nèi)分泌組織中的作用
        1.2.1 下丘腦和垂體(Hypothalamus and Pituitary)
        1.2.2 胎盤(Placenta)
        1.2.3 甲狀腺和甲狀旁腺(Thyroid and Parathyroid)
        1.2.4 胰腺(Pancreas)
        1.2.5 睪丸(Testis)
    1.3 GATA家族在生殖系統(tǒng)中的作用
        1.3.1 調(diào)控下游靶基因
        1.3.2 激素負反饋調(diào)節(jié)GATA
        1.3.3 性別決定和分化的作用
    1.4 卵巢GATA-4和GATA-6功能研究
        1.4.1 GATA-4和GATA-6定位研究
        1.4.2 GATA-4信號途徑
        1.4.3 GATA-4靶基因
    1.5 有關GATA-6研究總結(jié)
    1.6 本研究的目的意義
2 材料與方法
    2.1 試驗材料
        2.1.1 樣品的采集
        2.1.2 主要試劑及試劑盒
        2.1.3 主要試劑配制
        2.1.4 主要儀器設備
        2.1.5 應用的生物學軟件
    2.2 試驗方法
        2.2.1 總RNA提取及引物設計
        2.2.2 GATA-4和GATA-6片段的克隆及序列測定
        2.2.3 GATA-4真核表達載體構(gòu)建及鑒定
        2.2.4 顆粒細胞原代培養(yǎng)
        2.2.5 GATA-4真核表達載體瞬時轉(zhuǎn)染鵝顆粒細胞
        2.2.6 25-hydroxycholesterol誘導顆粒細胞凋亡
        2.2.7 細轉(zhuǎn)染GATA-4抵抗25-hydroxycholesterol毒性
        2.2.8 實時熒光定量PCR
3 結(jié)果與分析
    3.1 鵝GATA-4和GATA-6編碼區(qū)序列克隆與分析
        3.1.1 卵巢RNA提取結(jié)果
        3.1.2 PCR擴增結(jié)果
        3.1.3 編碼區(qū)序列拼接
    3.2 鵝GATA-4和GATA-6編碼區(qū)序列分析
        3.2.1 GATA-4和GATA-6編碼區(qū)氨基酸序列分析
        3.2.2 鵝GATA-4和GATA-6蛋白結(jié)構(gòu)域分析
    3.3 鵝GATA-4和GATA-6表達模式
        3.3.1 鵝GATA-4和GATA-6在3種類型的卵泡中表達情況
        3.3.2 鵝GATA-4和GATA-6在不同等級卵泡中的表達情況
    3.4 GATA-4真核表達載體構(gòu)建
        3.4.1 GATA-4載體構(gòu)建
        3.4.2 GATA-4轉(zhuǎn)染顆粒細胞及表達鑒定
        3.4.3 轉(zhuǎn)染GATA-4對下游靶基因影響及與顆粒細胞增殖關系
    3.5 25HC誘導顆粒細胞凋亡鑒定
        3.5.1 普通形態(tài)學觀察
        3.5.2 TURNEL綠色熒光鑒定凋亡細胞
        3.5.3 檢測類固醇通路上關鍵基因表達
    3.6 過表達GATA-4緩解25HC誘導顆粒細胞凋亡和25HC降低類固醇生成
        3.6.1 25HC處理細胞過表達GATA-4基因的表達量情況
        3.6.2 過表達GATA-4可以抵御25HC誘導細胞凋亡的能力
        3.6.3 過表達GATA-4平衡25HC抑制類固醇合成
4、討論
    4.1 鵝GATA-4和GATA-6分子結(jié)構(gòu)差異
    4.2 鵝GATA-4和GATA-6表達模式分析
    4.3 25HC誘導顆粒細胞凋亡、抑制類固醇合成基因表達
    4.4 過表達GATA-4促進顆粒細胞增殖、上調(diào)靶基因
    4.5 過表達GATA-4緩解25HC誘導凋亡和25HC抑制類固醇生成
5 結(jié)論
參考文獻
致謝
碩士研究生學習期間發(fā)表的論文



本文編號：3536172